杜仲Dirigent蛋白编码基因EuDIR3克隆及遗传转化

发布时间：2021-03-23 23:54

　　杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）属于杜仲科杜仲属,为第三纪孑遗物种,其叶和树皮均可入药,是我国特有的传统中药材。杜仲富含多种药用功能成分。此外,杜仲还是重要的胶源植物。Dirigent蛋白不仅在植物次生代谢产物合成过程中发挥重要作用,还参与植物抗逆性。研究杜仲Dirigent基因可为杜仲的开发利用提供理论参考。本研究在本实验室前期构建杜仲基因组和转录组数据库基础上,克隆了一个杜仲Dirigent蛋白编码基因并定名为EuDIR3,对其进行遗传转化和表达分析研究。取得以下研究结果:1、EuDIR3基因克隆及序列分析以杜仲嫩叶为材料,提取其RNA并反转录成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,克隆得到杜仲Dirigent编码基因（EuDIR3）。该序列长351 bp,不含内含子,编码116个氨基酸;分析表明EuDIR3与咖啡、菠萝和蓖麻等同源性较高;系统发育树分析则表明EuDIR3基因与黄胡萝卜和菠萝等亲缘关系更接近,与梅花和樱花较远;该基因编码的Dirigent蛋白分子量为11.84 kD,理论等电点为4.66,属于不稳定疏水性蛋白;在细胞质、线粒体和细胞核中均有分布... 

【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

杜仲中木脂素的母核结构

3)、大肠杆菌(E. coli)菌株DH5α、农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404由贵州大学农业生物工程研究院保存。图 2 pET-28a-NAD1 载体图Fig.2 Diagram of pET-28a-NAD1 vector1pET-28a-NAD15665bpf1 oriKanRoribomroplacIlacI promoterT7 promoterNAD1EcoRINotI

贵州大学 2019 届 硕士研究生学位论文第三章 结果与分析基因克隆与生物信息学分析 RNA 提取及 EuDIR3 基因扩增光光度计及 1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示所提取的杜仲.8-2.2 之间，28S 带较 18S 带更亮更宽，说明 RNA 无蛋白质、D高，且提取质量佳，没有降解，可用于后续试验。得到的杜仲嫩叶 cDNA 为模板，利用设计好的引物(F-1/R-1)，进 PCR 扩增，产物经 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示获得片段。杜仲总 RNA 提取及 EuDIR3 基因扩增见图 4。


本文编号：3096642