鸟类TLRs基因的适应性进化研究
发布时间：2021-03-25 18:35
先天性免疫是抵御和杀伤外界病原微生物入侵机体的第一道防线,在免疫反应前期对机体的保护上起到重要的作用。Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）作为一种介导先天免疫的重要功能性蛋白质,通过模式识别受体（Pattern recognition receptors,PRRs）直接作用于病原体,参与并调控特异性免疫应答,在先天性免疫和特异性免疫中起到桥梁作用。鸟类广泛分布于各地,其生存环境和食性均有着明显的差异,因而接触到病原微生物的种类和结构也有所不同。本研究基于TLRs基因探讨以下3个问题:1)鸟类TLRs基因家族的系统发育关系如何?2)鸟类TLR1和TLR2多拷贝基因的进化模式出现了怎样的差异?3)外界因素如何驱动鸟类TLRs基因的进化?本研究通过对绿尾虹雉、红腹角雉、红腹锦鸡、蓝孔雀、环颈雉和普通鹌鹑TLRs基因的克隆,并结合网上已有数据,获得主要结果如下:1)获得6个物种TLR家族基因完整编码区序列,其长度从1959 bp（TLR1B）到3180 bp（TLR7）之间不等;10个基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性在鸡形目中都比较保守,相似性均在90%以上;结合...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：141 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TLRs信号通路图，该图引自[34]
7图1.2脊椎动物Toll样基因系统发育[40]Fig1.2thephylogeneticofvertebrateToll-likereceptors[40]1.4鸟类Toll样受体基因家族研究进展鸟类和哺乳动物分化时间大约在3亿年前，虽然鸟类与哺乳动物的免疫反应大致相似，然而在淋巴组织、免疫细胞及抗体多样性等方面都存在显著差异。通过对红原鸡（GallusGallus）基因组序列的分析发现，虽然所有主要的细胞因子、趋化因子及整合素等基因家族成员均在鸡基因组中被发现，但其家族成员的数量却有所减少，特别是在多基因家族中[44]，尤其在MHC家族成员中，其数量与人类相比小了近20倍，因而也被称作最低必需MHC[44]。同时在鸡中也检测到TLRs基因、哺乳动物衔接蛋白的同源基因、参与TLRs基因下游信号传导的激酶以及效应分子等。在鸟类中共发现有10种TLRs基因，分别为TLR1A、TLR1B、TLR2A、TLR2B、TLR3、TLR4、TLR5、
262.4结果2.4.1基因组DNA提取本实验采用传统酚/氯仿抽提法，对6个鸡形目鸟类基因组DNA进行提取，并经凝胶电泳和ND-2000超微量核酸蛋白测定仪对基因组DNA的质量和浓度进行了检测。如图2.1所示，除了绿尾虹雉条带较弱以外，其余5个均清晰明亮，说明基因组DNA提取的整体质量和浓度均较高，可以满足后续实验的要求。图2.1基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测结果。M：DNAmarker（DL2000），Lolh：绿尾虹雉，Trte：红腹角雉，Chpi：红腹锦鸡，Coco：普通鹌鹑，Phco：环颈雉，Paus：蓝孔雀Fig2.1TheagarosegelelectrophoresisresultsofgenomicDNA.M：DNAmarker（DL2000），Lolh:L.lhuysii,Trte:T.temminckii,Chpi:C.pictus,Coco:C.coturnix,Phco:P.colchicus,Paus:P.cristatus2.4.2部分PCR扩增与测序结果通过设计特异性引物，以前面检验合格的基因组DNA为模板，采用PCR扩增技术对目的基因进行体外扩增。由于引物较多，因而PCR扩增图片也较多，由于篇幅有限，不能一一列出，因此选取部分扩增和测序结果为代表（图2.2）。2.4.3鸡形目鸟类TLRs基因序列特征分析通过将扩增的高质量的PCR产物送往北京擎科梓熙生物技术（成都）有限公司和生物工程（成都）有限公司进行双向测序，从公司返回的测序峰图显示，测序峰图单一、清晰没有套峰、乱峰，说明测序结果可用。由于鸟类TLRs基因编码区序列普
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体信号通路的负调控[J]. 孙冰,韩代书. 生物化学与生物物理进展. 2009(12)
[2]现生鸟类的起源和早期演化[J]. 张玉光. 自然杂志. 2007(01)
[3]中国首次发现真正会飞的“恐龙”——中华神州鸟（新属新种）[J]. 季强,姬书安,尤海鲁,张建平,袁崇喜,季鑫鑫,李景路,李印先. 地质通报. 2002(07)
[4]评《鸟类的起源与演化》[J]. 周忠和. 古脊椎动物学报. 1997(02)
[5]中国最早鸟类化石的发现及鸟类的起源[J]. 季强,姬书安. 中国地质. 1996(10)
硕士论文
[1]偶蹄目TLR1-4基因的分子进化研究[D]. 顾棚.四川农业大学 2014
本文编号：3100115
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：141 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TLRs信号通路图，该图引自[34]
7图1.2脊椎动物Toll样基因系统发育[40]Fig1.2thephylogeneticofvertebrateToll-likereceptors[40]1.4鸟类Toll样受体基因家族研究进展鸟类和哺乳动物分化时间大约在3亿年前，虽然鸟类与哺乳动物的免疫反应大致相似，然而在淋巴组织、免疫细胞及抗体多样性等方面都存在显著差异。通过对红原鸡（GallusGallus）基因组序列的分析发现，虽然所有主要的细胞因子、趋化因子及整合素等基因家族成员均在鸡基因组中被发现，但其家族成员的数量却有所减少，特别是在多基因家族中[44]，尤其在MHC家族成员中，其数量与人类相比小了近20倍，因而也被称作最低必需MHC[44]。同时在鸡中也检测到TLRs基因、哺乳动物衔接蛋白的同源基因、参与TLRs基因下游信号传导的激酶以及效应分子等。在鸟类中共发现有10种TLRs基因，分别为TLR1A、TLR1B、TLR2A、TLR2B、TLR3、TLR4、TLR5、
262.4结果2.4.1基因组DNA提取本实验采用传统酚/氯仿抽提法，对6个鸡形目鸟类基因组DNA进行提取，并经凝胶电泳和ND-2000超微量核酸蛋白测定仪对基因组DNA的质量和浓度进行了检测。如图2.1所示，除了绿尾虹雉条带较弱以外，其余5个均清晰明亮，说明基因组DNA提取的整体质量和浓度均较高，可以满足后续实验的要求。图2.1基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测结果。M：DNAmarker（DL2000），Lolh：绿尾虹雉，Trte：红腹角雉，Chpi：红腹锦鸡，Coco：普通鹌鹑，Phco：环颈雉，Paus：蓝孔雀Fig2.1TheagarosegelelectrophoresisresultsofgenomicDNA.M：DNAmarker（DL2000），Lolh:L.lhuysii,Trte:T.temminckii,Chpi:C.pictus,Coco:C.coturnix,Phco:P.colchicus,Paus:P.cristatus2.4.2部分PCR扩增与测序结果通过设计特异性引物，以前面检验合格的基因组DNA为模板，采用PCR扩增技术对目的基因进行体外扩增。由于引物较多，因而PCR扩增图片也较多，由于篇幅有限，不能一一列出，因此选取部分扩增和测序结果为代表（图2.2）。2.4.3鸡形目鸟类TLRs基因序列特征分析通过将扩增的高质量的PCR产物送往北京擎科梓熙生物技术（成都）有限公司和生物工程（成都）有限公司进行双向测序，从公司返回的测序峰图显示，测序峰图单一、清晰没有套峰、乱峰，说明测序结果可用。由于鸟类TLRs基因编码区序列普
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体信号通路的负调控[J]. 孙冰,韩代书. 生物化学与生物物理进展. 2009(12)
[2]现生鸟类的起源和早期演化[J]. 张玉光. 自然杂志. 2007(01)
[3]中国首次发现真正会飞的“恐龙”——中华神州鸟（新属新种）[J]. 季强,姬书安,尤海鲁,张建平,袁崇喜,季鑫鑫,李景路,李印先. 地质通报. 2002(07)
[4]评《鸟类的起源与演化》[J]. 周忠和. 古脊椎动物学报. 1997(02)
[5]中国最早鸟类化石的发现及鸟类的起源[J]. 季强,姬书安. 中国地质. 1996(10)
硕士论文
[1]偶蹄目TLR1-4基因的分子进化研究[D]. 顾棚.四川农业大学 2014
本文编号：3100115
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3100115.html
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