芍药HSP70基因克隆及其功能研究

发布时间：2021-03-26 18:21

　　芍药（Paeonia lactiflora Pall.）是我国的传统名花,因性喜冷凉干燥,多分布或栽培在我国华北、东北、西北和西南地区。近年来,随着芍药在园林花境景观中的广泛应用和芍药高档切花市场的兴起,浙江杭州、江苏扬州和上海等“长三角”地区纷纷从山东菏泽、河南洛阳等北方主产区开展“芍药南移”工作。然而,由于我国江南地区夏季高温持续时间长,使得大多数优良芍药品种“南移”后出现生长不良、难以展现原产地的优良观赏性状。夏季高温已然成为限制芍药切花在南方规模化生产及其在园林景观中广泛应用的主要因素之一,而找到调控芍药耐高温能力的关键基因对于培育耐高温能力强的芍药品种至关重要。为此,本研究克隆了芍药HSP70基因并对其序列进行生物信息学分析,通过表达模式、原核表达、亚细胞定位等研究明确芍药HSP70基因的表达特性,构建芍药HSP70基因的超表达载体并遗传转化拟南芥、观察高温胁迫对转基因植株的影响,从而深入了解芍药HSP70基因在调控芍药耐高温能力方面的功能。主要结果如下:（1）通过RACE技术克隆了芍药HSP70基因的cDNA全长序列,该基因长2195 bp,具有5’非编码区（70 bp）、... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１通过ＲＡＣＥ方法获得的芍药／ｉＳ／ＶＯ基因ｃＤＮＡ片段??

Ｍ：?ＤＬ５０００；?１：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐ／／／５Ｐ７０??在此基础之上，以芍药‘紫凤羽’叶片中所提取的ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ方法进行??Ｐ／／／５Ｐ７０ＤＮＡ序列的扩増，获得一条约为３０００?ｂｐ的条带（图２－３），经过扩增条带回收、??连接、转化、摇菌、质粒提取、测序等一系列过程后，最终拼接获得３６３６?ｂｐ的序列。通??过序列比对，该ＤＮＡ序列具有２个外显子和１个内含子，该内含子开始于序列ＧＴ并以ＡＧ??结束，符合Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ和Ｃｈａｍｂｏｎ提出的“ＧＴ－ＡＧ”剪切规律［１１８］，登录号为ＭＦ８１７４９８?（图??２－４、２－５）。??２１４?１７３９??ＭＦ８１７４９８?５?ｒＴ??＾??－３??｜??｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜???Ｏｂｐ?５００ｂｐ?１０００ｂｐ?１５００ｂｐ?２０００ｂｐ?２５００ｂｐ?３０００ｂｐ?３５００ｂｐ??图２－４?／Ｖ／／ＳＰ７０基因的ＤＮＡ结构??外显子为灰色盒子，内含子为细线，非翻译区为黑线??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｐ１ＨＳＰ７０??Ｅｘｏｎｓ?ａｒｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｇｒｅｙ?ｂｏｘｅｓ，?ｉｎｔｒｏｎｓ?ａｓ?ｌｉｎｅｓ?ａｎｄ?ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?ｂｌａｃｋ?ａｓ?ｌｉｎｅｓ??

?１?ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－７高温胁迫下芍药叶片的相对含水量??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｗａｔｅｒ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??采用ＤＡＢ染色法观测了高温胁迫下芍药叶片中１七（）２积累水平，ＤＡＢ染色越深，表??明Ｈ２０２含量越高。从图２－８可以看出，随着高温胁迫时间的推移，芍药叶片的颜色不断??加深，Ｈ２０２含量显著增加。??Ｏｄ?１ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－８高温胁迫下芍药叶片中Ｈ２０２积累水平??Ｆｉｇｕｒｅ?２－８?Ｈ２Ｏ２?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??１１１??Ｏｄ?１?ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??图２－９高温胁迫下芍药叶片中ｏ２＿积累水平??Ｆｉｇｕｒｅ?２－９?Ｏ２＇?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??采用荧光探针法观测了高温胁迫下芍药叶片中〇２＿积累水平，荧光强度越强，表明??〇２－积累越多。从图２－９可以看出

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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本文编号：3102036