利用条件性基因敲除小鼠研究JAK2在糖尿病ED中的作用与机制

发布时间：2021-03-27 01:13

　　第一部分JAK2基因敲除对糖尿病小鼠勃起功能的影响及机制[目的]探讨非受体型酪氨酸激酶2（JAK2）基因敲除对糖尿病小鼠勃起功能的影响及机制。[方法]40只8周龄雄性条件性JAK2基因敲除(Cre^+/+-Jak2^fl/fl)小鼠随机均分为4组:正常对照组、JAK2基因敲除组、糖尿病组和糖尿病+JAK2基因敲除组。糖尿病通过连续5天腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg/d来诱导。3个月后,再通过连续5天腹腔注射他莫昔芬20mg/kg/d来诱导JAK2基因敲除。再过1个月后,通过阴茎海绵体内压（ICP）/平均动脉压（MAP）来评价勃起功能,收集阴茎海绵体标本,用Western blot、免疫组化、免疫荧光等方法检测相关蛋白的表达。[结果]在正常小鼠中敲除JAK2基因对勃起功能无明显影响。糖尿病小鼠的勃起功能明显降低,且JAK2磷酸化增加（P<0.05）。在糖尿病小鼠中敲除JAK2基因后,JAK2的表达和磷酸化均显著减少,小鼠的勃起功能明显改善（P<0.05）。糖尿病可以导致小鼠阴茎海绵体中内皮源性一氧化氮合酶（e NOS）的磷酸化减少、N... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

基因鉴定的琼脂糖凝胶电泳结果

通过电刺激海绵体神经诱导勃起,利用ICP/MAP来评判小鼠的勃起功能。JAK2-/-组小鼠的勃起功能与Control组相比无显著差异(图1-2)。DM组小鼠的勃起功能明显低于Control组小鼠(P<0.05)。DM+JAK2-/-组小鼠的勃起功能也低于Control组小鼠,但比DM组有所改善(P<0.05)。这说明,在正常小鼠体内敲除JAK2基因,不会对勃起功能造成明显影响。而在糖尿病小鼠中敲除JAK2基因,可改善勃起功能。4. JAK2的表达和磷酸化情况

利用Western blot检测各组小鼠阴茎海绵体中JAK2的表达和磷酸化情况,P-JAK2是JAK2的激活状态。通过免疫组化来进一步检测阴茎海绵体中JAK2的表达情况。Western blot结果显示,与Control组相比,DM组小鼠阴茎海绵体中JAK2的表达无明显增加,但JAK2磷酸化显著提高(图1-3,P<0.05)。JAK2-/-组小鼠JAK2的表达和磷酸化水平均低于Control组(P<0.05)。DM+JAK2-/-组小鼠JAK2的表达和磷酸化水平均低于Control组,且低于DM组(P<0.05)。免疫组化的结果与Western blot类似(图1-4)。这些结果表明糖尿病对JAK2的基础表达无明显影响,但可以显著提高JAK2的活性。敲除JAK2基因既极大地降低了JAK2的表达量,也明显减少了JAK2的磷酸化水平。

【参考文献】：
期刊论文
[1]经NO-cGMP-PDE5通路治疗勃起功能障碍的中药研究进展[J]. 廖晖,Jacob Rajfer.  中华男科学杂志. 2012(03)
[2]Antioxidant properties of berberine on cultured rabbit corpus cavernosum smooth muscle cells injured by hydrogen peroxide[J]. Yan TAN~(2,3,5),Qiang TANG~4,Ben-rong HU~4,Ji-zhou XIANG~4~2 Institute of Urology,Renmin Hospital,Yunyang Medical College,Shiyan 442000 China,~3 Department of Pharmacology,Yunyang MedicalCollege,Shiyan 442000,China,~4 Department of Pharmacology,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Teehnology,Wuhan 430030,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(12)



本文编号：3102594