致癌基因PIM1通过磷酸化SND1促进细胞衰老

发布时间：2021-03-27 22:36

　　目的:编码组成型活性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的致癌基因PIM1参与细胞增殖,存活,分化和凋亡的调节。其表达的上调也与各种肿瘤的发生和发展密切相关。最近,有越来越多的文献报道PIM1介导细胞衰老的作用,其确切机制尚不清楚。此外,在随后的研究中,细胞衰老越来越被视为对抗癌发生的保护机制。因此,探索新的衰老机制可能为癌症的治疗提供新的思路。方法:通过使用FLAG-M2珠子免疫沉淀具有Flag-PIM1过表达的2BS细胞的细胞提取物,然后通过SDS-PAGE电泳解析,在银染后进行质谱分析筛选PIM1相关蛋白。接下来在2BS细胞中过表达相关质粒,利用co-ip和pull-down以及免疫荧光实验进一步验证筛选出的目的蛋白SND1与PIM1是否相互结合。然后我们利用激酶实验以及western-blot实验进一步验证了SND1是否能被PIM1磷酸化。既然PIM1能磷酸化SDN1,那之后是否会引起细胞衰老呢,具体机制又是什么呢?紧接着我们敲低SND1并利用免疫荧光、免疫组化、CCK8、EDU、β-gal实验来验证我们的猜想。最后我们在2BS细胞中敲低SND1然后测序,目的是观察本研究引起了衰老改变的哪些... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PIM1与SND1相互作用

天津医科大学硕士学位论文现 SND1 表达水平的降低取决于 PIM1 表达的增加，但这种现象在用 MG132 处理的组中未观察到。同时，在具有 K67M 过表达的 2BS 细胞中，MG132 对 SND1的蛋白质水平没有影响（图 2D）。这些结果表明 PIM1 还可以促进 SND1 的降解。综上所诉，我们可以得出结论，PIM1 可以通过磷酸化 SND1 促进其降解。

31图 3：SND1 参与 PIM1 诱导的细胞衰老。（A）EdU 掺入测定 S 期细胞的百分比。（B）用指定载体感染的 2BS 细胞的代表性显微镜视图，其具有 SA-b-gal 活性染色（。C）通过 CCK8 测定法测量用指定载体感染的 2BS 细胞的细胞活力。（D）在年轻和老化的结肠腺瘤组织中 PIM1 和 SND1 的免疫组织化学染色。


本文编号：3104358