家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的诱导表达模式及蜕皮激素响应元件核心保守区的识别
发布时间：2021-03-28 04:37
核受体基因家族是介导昆虫蜕皮激素（20E）作用的关键信号分子。为了研究家蚕丝腺中核受体异源二聚体编码基因——蜕皮激素受体基因Bm EcR和超气门蛋白基因Bm USP的表达模式,应用实时荧光定量PCR技术检测家蚕5龄幼虫正常状态下和用2×10-3μg/μL蜕皮激素处理后Bm EcR与Bm USP在丝腺组织中的表达变化。结果表明,20E处理后,Bm EcRA、Bm EcR-B1和Bm USP在中、后部丝腺的表达量与对照组相比均有不同程度增加,说明20E能够促进Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达;但中部丝腺与后部丝腺Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达变化趋势不同。利用等温滴定量热技术（ITC）获得的家蚕蜕皮激素受体结构域蛋白Bm EcR-B1D与蜕皮激素响应元件Bm E75A-EcRE及其缺失突变体相互作用的亲和力常数（K）、反应热（ΔH）和熵（ΔS）,显示了Bm EcR-B1D蛋白能够与Bm E75A-EcRE进行结合,并发现Bm E75A-EcRE的核心保守区为编码序列TCTTC,推测该区域有可能是Bm EcR-B...
【文章来源】：蚕业科学. 2016,42(03)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE或其缺失突变体结合反应的等温滴定量热试验示意图
428蚕业科学2016;42(3)达到最大值，20E处理组与对照组家蚕相比，后部丝腺中BmEcＲ-A、BmEcＲ-B1和BmUSP的表达上调，最高上调倍数分别为4.98、5.60和8.58。1—5龄4d，2—5龄5d，3—5龄6d，4—5龄7d，5—上蔟1d，6—上蔟2d;*P＜0.05，＊＊P＜0.01。图3同。1—Day4ofthe5thinstar，2—Day5ofthe5thinstar，3—Day6ofthe5thinstar，4—Day7ofthe5thinstar，5—Day1aftermounting，6—Day2aftermounting.*P＜0.05，＊＊P＜0.01.ThesameinFig.3.图220E诱导BmEcＲ-A(A)、BmEcＲ-B1(B)和BmUSP(C)基因在家蚕中部丝腺的表达变化Fig.2ExpressionchangeofBmEcＲ-A(A)，BmEcＲ-B1(B)andBmUSP(C)inmiddlesilkglandofBombyxmoriinducedby20E图320E诱导BmEcＲ-A(A)、BmEcＲ-B1(B)和BmUSP(C)基因在家蚕后部丝腺的表达变化Fig.3ExpressionchangeofBmEcＲ-A(A)，BmEcＲ-B1(B)andBmUSP(C)inposteriorsilkglandofBombyxmoriinducedby20E2.3BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE的结合反应图4为在25℃条件下对BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE进行的ITC试验结果，其中上半部分为反应峰值，下半部分为热力学曲线。表1为用Or-igin软件分析得到的亲和力常数(K)、反应热(ΔH)和熵(ΔS)等热力学数据。试验结果表明BmEcＲ-
第3期刘云垒等:家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的诱导表达模式及蜕皮激素响应元件核心保守区的识别429B1D蛋白与BmE75A-EcＲE发生了结合反应，并且该反应为放热反应。结合数据分析，BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE为焓驱动过程(反应热ΔH＜0)，由熵(ΔS)＜0可以推断BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE之间的主要作用力为范德华力和氢键。图425℃条件下BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE相互作用的等温滴定量热(ITC)试验结果Fig.4Isothermaltitrationcalorimetry(ITC)resultsofinteractionbetweenBmEcＲ-B1DandBmE75A-EcＲEat25℃表1等温滴定量热(ITC)试验的反应底物及其对应的热力学参数Table1Thereactionsubstratesofisothermaltitrationcalori-metry(ITC)experimentandtheircorrespondingthermodynamicparameters底物SubstrateK/(L·mol－1)ΔH/(J·mol－1)ΔS/(J·mol－1·K－1)BmE75A-EcＲE8.83E6－4.92800E5－1519.808BmE75A-EcＲE11.51E7－2.14300E3－581.965BmE75A-EcＲE25.94E6－3.86600E3－1168.110BmE75A-EcＲE3———BmE75A-EcＲE46.94E6－3.43485E3－1021.5792.4BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75-EcＲE缺失突变体的结合情况如图1所示，将BmE75A-EcＲE序列通过基因合成的方法按照从3'端至5'端顺次缺失5bp碱基，得到的缺失突变体命名为BmE75A-EcＲE1、BmE75A-EcＲE2、BmE75A-EcＲE3和BmE75A-EcＲE4。ITC试验结果如图5～8所示，根据反应峰值图和热力学曲线可以判断BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE1(图5)、BmE75A-EcＲE2(图6)和BmE75A-EcＲE4(图8)的反应属于放热反应，而且是一类结合位点的反应;然而，BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE3的反应则是既不属吸热也不属放热反应(图7)。结果表明，BmEcＲ-B1D
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1的启动子调控区域活性检测[J]. 黄明霞,杜杰,刘云垒,赵国栋,卫正国,沈卫德. 蚕业科学. 2014(03)
[2]家蚕常用内参基因稳定性分析及丝蛋白相关基因表达调控研究[J]. 吴玉,翟渊粉,黄明霞,赵国栋,李兵,卫正国,沈卫德. 中国细胞生物学学报. 2013(04)
[3]蜕皮激素诱导家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达变化[J]. 苏保锦,吴玉,赵斯斯,赵国栋,卫正国,李兵,沈卫德. 蚕业科学. 2012(02)
本文编号：3104901
【文章来源】：蚕业科学. 2016,42(03)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE或其缺失突变体结合反应的等温滴定量热试验示意图
428蚕业科学2016;42(3)达到最大值，20E处理组与对照组家蚕相比，后部丝腺中BmEcＲ-A、BmEcＲ-B1和BmUSP的表达上调，最高上调倍数分别为4.98、5.60和8.58。1—5龄4d，2—5龄5d，3—5龄6d，4—5龄7d，5—上蔟1d，6—上蔟2d;*P＜0.05，＊＊P＜0.01。图3同。1—Day4ofthe5thinstar，2—Day5ofthe5thinstar，3—Day6ofthe5thinstar，4—Day7ofthe5thinstar，5—Day1aftermounting，6—Day2aftermounting.*P＜0.05，＊＊P＜0.01.ThesameinFig.3.图220E诱导BmEcＲ-A(A)、BmEcＲ-B1(B)和BmUSP(C)基因在家蚕中部丝腺的表达变化Fig.2ExpressionchangeofBmEcＲ-A(A)，BmEcＲ-B1(B)andBmUSP(C)inmiddlesilkglandofBombyxmoriinducedby20E图320E诱导BmEcＲ-A(A)、BmEcＲ-B1(B)和BmUSP(C)基因在家蚕后部丝腺的表达变化Fig.3ExpressionchangeofBmEcＲ-A(A)，BmEcＲ-B1(B)andBmUSP(C)inposteriorsilkglandofBombyxmoriinducedby20E2.3BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE的结合反应图4为在25℃条件下对BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE进行的ITC试验结果，其中上半部分为反应峰值，下半部分为热力学曲线。表1为用Or-igin软件分析得到的亲和力常数(K)、反应热(ΔH)和熵(ΔS)等热力学数据。试验结果表明BmEcＲ-
第3期刘云垒等:家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的诱导表达模式及蜕皮激素响应元件核心保守区的识别429B1D蛋白与BmE75A-EcＲE发生了结合反应，并且该反应为放热反应。结合数据分析，BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE为焓驱动过程(反应热ΔH＜0)，由熵(ΔS)＜0可以推断BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE之间的主要作用力为范德华力和氢键。图425℃条件下BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE相互作用的等温滴定量热(ITC)试验结果Fig.4Isothermaltitrationcalorimetry(ITC)resultsofinteractionbetweenBmEcＲ-B1DandBmE75A-EcＲEat25℃表1等温滴定量热(ITC)试验的反应底物及其对应的热力学参数Table1Thereactionsubstratesofisothermaltitrationcalori-metry(ITC)experimentandtheircorrespondingthermodynamicparameters底物SubstrateK/(L·mol－1)ΔH/(J·mol－1)ΔS/(J·mol－1·K－1)BmE75A-EcＲE8.83E6－4.92800E5－1519.808BmE75A-EcＲE11.51E7－2.14300E3－581.965BmE75A-EcＲE25.94E6－3.86600E3－1168.110BmE75A-EcＲE3———BmE75A-EcＲE46.94E6－3.43485E3－1021.5792.4BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75-EcＲE缺失突变体的结合情况如图1所示，将BmE75A-EcＲE序列通过基因合成的方法按照从3'端至5'端顺次缺失5bp碱基，得到的缺失突变体命名为BmE75A-EcＲE1、BmE75A-EcＲE2、BmE75A-EcＲE3和BmE75A-EcＲE4。ITC试验结果如图5～8所示，根据反应峰值图和热力学曲线可以判断BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE1(图5)、BmE75A-EcＲE2(图6)和BmE75A-EcＲE4(图8)的反应属于放热反应，而且是一类结合位点的反应;然而，BmEcＲ-B1D蛋白与BmE75A-EcＲE3的反应则是既不属吸热也不属放热反应(图7)。结果表明，BmEcＲ-B1D
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1的启动子调控区域活性检测[J]. 黄明霞,杜杰,刘云垒,赵国栋,卫正国,沈卫德. 蚕业科学. 2014(03)
[2]家蚕常用内参基因稳定性分析及丝蛋白相关基因表达调控研究[J]. 吴玉,翟渊粉,黄明霞,赵国栋,李兵,卫正国,沈卫德. 中国细胞生物学学报. 2013(04)
[3]蜕皮激素诱导家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达变化[J]. 苏保锦,吴玉,赵斯斯,赵国栋,卫正国,李兵,沈卫德. 蚕业科学. 2012(02)
本文编号：3104901
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