慢病毒介导的RNAi沉默GTPBP4基因对人结肠癌细胞HT29生物学行为影响的探究
发布时间：2021-03-29 00:48
目的:利用pGCSIL-GFP/GTPBP4-RNAi慢病毒载体转染人结肠癌细胞HT29,沉默GTPBP4基因,探究GTPBP4 RNAi对HT29细胞生物学行为的影响。方法:1.慢病毒最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）的筛选及细胞转染慢病毒GTPBP4 RNAi载体及阴性对照慢病毒载体由上海吉凯基因公司包装完成;预实验用慢病毒转染人HT29细胞筛选出最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）,用筛选出的最佳MOI进行正式转染实验。将处于对数生长期的HT29细胞分为实验组和阴性对照组,于转染前一天铺板,转染细胞72h后荧光显微镜下观察GFP标记所激发出的荧光丰度,以此初步判断细胞转染效率。2.Real-time PCR及Western blot技术检测转染慢病毒后GTPBP4基因mRNA和蛋白水平的沉默效率（1）慢病毒转染细胞72h后,分别提取实验组和对照组HT29细胞总RNA,根据Takara公司逆转录试剂盒说明书合成cDNA,采用Real-time PCR检测GTPBP4基因mRNA表达水平;（2）慢病毒转染细...
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒转染HT29细胞72h后，荧光显微镜下观察细胞转染效率（A、B:实验组细胞分别在荧光、白光下所观察的视野；C、D:阴性对照组细胞分别在荧光、白光下所观察的视野）
定量 PCR 检测准染后 GTPBP4 在 mRNA 水平表达ion of GTPBP4-mRNA in HT29 transfected with lentivPCR(*P<0.05)荧光定量 PCR 检测准染后 GTPBP4 在 mRNA 水平n of GTPBP4-mRNA in HT29 transfected with lentiviruroup NGTPBP4 mRNA,ntrol 3 0.99±0.55P4 RNAi 3 0.03±0.12P 0.001tern blot 检测显示经 GTPBP4 RNAi 转染的较，GTPBP4 蛋白水平明显下降（图 3），与
3 GTPBP4 RNAi 转染 HT29 细胞后蛋白水平的敲减on of GTPBP4 protein in HT29 transfected with lentivir GTPBP4 基因对 HT29 细胞生物学行为的影测细胞增殖能力验检测发现实验组的 OD 值分别在 24h，48h阴性对照组（图 4），且两组之间差异具有统），GTPBP4 RNAi 转染后，细胞的增殖能力与 HT29 细胞增殖能力相关。
【参考文献】：
期刊论文
[1]他汀药物对p53突变肿瘤细胞的作用及机制[J]. 牟汉川,杨志宽,暴亚锋,王玉玲,刘静,张继虹. 中国老年学杂志. 2017(04)
[2]补肾解毒散结方醇提物调控HIPK2-p53信号通路抑制人结肠癌细胞增殖[J]. 冯媛媛,周利红,王炎,孙筱婷,李春浦,朱惠蓉,李琦. 中华中医药杂志. 2017(01)
[3]结直肠癌组织Tcf-4表达与MMP7和survivin表达的关系及临床意义[J]. 欧玉荣,景桂英,吴琼,高杉,承泽农,董修芹. 四川大学学报(医学版). 2015(04)
[4]结直肠癌靶向治疗研究进展[J]. 沈胤晨,石远凯,韩晓红. 中华病理学杂志. 2015 (06)
[5]p53及其凋亡刺激蛋白对结肠癌细胞自噬和凋亡影响机制探讨[J]. 封晓昆,王贲士,王安娜,陈德喜,郭洪亮. 中华肿瘤防治杂志. 2015(10)
[6]结直肠癌流行病学特征及其危险因素[J]. 闫涛,苏俐,张星光. 疾病监测与控制. 2015(04)
[7]结直肠癌流行病学趋势[J]. 李道娟,李倩,贺宇彤. 肿瘤防治研究. 2015(03)
[8]结直肠癌组织Survivin表达及其与临床病理特征的关系[J]. 薛军,武雪亮,郭飞,王立坤,张鹏娟,屈明,赵秀芳. 中国医师进修杂志. 2015 (02)
[9]p53 mutations in colorectal cancer-molecular pathogenesis and pharmacological reactivation[J]. Xiao-Lan Li,Jianbiao Zhou,Zhi-Rong Chen,Wee-Joo Chng. World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[10]慢病毒载体及其研究进展[J]. 孟凡荣,陈琛,万海粟,周清华. 中国肺癌杂志. 2014(12)
本文编号：3106563
【文章来源】：西南医科大学四川省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒转染HT29细胞72h后，荧光显微镜下观察细胞转染效率（A、B:实验组细胞分别在荧光、白光下所观察的视野；C、D:阴性对照组细胞分别在荧光、白光下所观察的视野）
定量 PCR 检测准染后 GTPBP4 在 mRNA 水平表达ion of GTPBP4-mRNA in HT29 transfected with lentivPCR(*P<0.05)荧光定量 PCR 检测准染后 GTPBP4 在 mRNA 水平n of GTPBP4-mRNA in HT29 transfected with lentiviruroup NGTPBP4 mRNA,ntrol 3 0.99±0.55P4 RNAi 3 0.03±0.12P 0.001tern blot 检测显示经 GTPBP4 RNAi 转染的较，GTPBP4 蛋白水平明显下降（图 3），与
3 GTPBP4 RNAi 转染 HT29 细胞后蛋白水平的敲减on of GTPBP4 protein in HT29 transfected with lentivir GTPBP4 基因对 HT29 细胞生物学行为的影测细胞增殖能力验检测发现实验组的 OD 值分别在 24h，48h阴性对照组（图 4），且两组之间差异具有统），GTPBP4 RNAi 转染后，细胞的增殖能力与 HT29 细胞增殖能力相关。
【参考文献】：
期刊论文
[1]他汀药物对p53突变肿瘤细胞的作用及机制[J]. 牟汉川,杨志宽,暴亚锋,王玉玲,刘静,张继虹. 中国老年学杂志. 2017(04)
[2]补肾解毒散结方醇提物调控HIPK2-p53信号通路抑制人结肠癌细胞增殖[J]. 冯媛媛,周利红,王炎,孙筱婷,李春浦,朱惠蓉,李琦. 中华中医药杂志. 2017(01)
[3]结直肠癌组织Tcf-4表达与MMP7和survivin表达的关系及临床意义[J]. 欧玉荣,景桂英,吴琼,高杉,承泽农,董修芹. 四川大学学报(医学版). 2015(04)
[4]结直肠癌靶向治疗研究进展[J]. 沈胤晨,石远凯,韩晓红. 中华病理学杂志. 2015 (06)
[5]p53及其凋亡刺激蛋白对结肠癌细胞自噬和凋亡影响机制探讨[J]. 封晓昆,王贲士,王安娜,陈德喜,郭洪亮. 中华肿瘤防治杂志. 2015(10)
[6]结直肠癌流行病学特征及其危险因素[J]. 闫涛,苏俐,张星光. 疾病监测与控制. 2015(04)
[7]结直肠癌流行病学趋势[J]. 李道娟,李倩,贺宇彤. 肿瘤防治研究. 2015(03)
[8]结直肠癌组织Survivin表达及其与临床病理特征的关系[J]. 薛军,武雪亮,郭飞,王立坤,张鹏娟,屈明,赵秀芳. 中国医师进修杂志. 2015 (02)
[9]p53 mutations in colorectal cancer-molecular pathogenesis and pharmacological reactivation[J]. Xiao-Lan Li,Jianbiao Zhou,Zhi-Rong Chen,Wee-Joo Chng. World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[10]慢病毒载体及其研究进展[J]. 孟凡荣,陈琛,万海粟,周清华. 中国肺癌杂志. 2014(12)
本文编号：3106563
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