大豆转基因成分检测技术研究及转基因大豆GE-J16的代谢组学分析

发布时间：2021-04-02 00:40

　　近年来,大豆进口量不断增多,且转基因大豆占很大比例,市场上转基因大豆制品随处可见,基于以上情况,我国本土非转基因大豆可能存在被污染的风险。因此,我们选择706份国内大豆品种（品系）,进行转基因成分的PCR定性检测。本文对大豆中可能含有的多个调控元件Ca MV35S启动子、FMV35S启动子和NOS终止子、以及针对我国批准进口的主要耐除草剂转基因大豆转化体GTS40-3-2和MON89788含有的目的基因EPSPS进行PCR检测,同时通过对MON89788转化体序列自行设计EPSPS引物序列,扩增出381 bp目的条带,为建立MON89788大豆转化体特异性定性PCR检测方法,设计5’端和3’端旁侧序列引物,扩增出445 bp和340 bp的产物,此方法可适用于MON89788大豆的特异性检测。在706份大豆品种中,最终测得含有Ca MV35S启动子的转基因成分所占比例为1%,含有FMV35S启动子的转基因成分所占比例为0.85%,含有NOS终止子的转基因成分所占比例为0.71%,含有EPSPS目的基因的转基因成分所占比例为0.85%,耐除草剂转基因品系MON89788所占比例为0.85... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大豆样品基因组DNA电泳检测Fig.2-1DNAelectrophoresisofsoybeansamples

中国农业科学院硕士学位论文第二章大豆转基因成分检测技术研究13图2-2大豆样品内源基因Lectin检测结果注：“M”：DL2000DNAmarker，“+”：阳性对照，“-”：阴性对照，“C”：空白对照，1：P80081，2：P80166，3：P80306，4：P70059，5：P70167，6：P70188。Fig.2-2DetectionresultsoftheendogenousgeneLectininsoybeansamplesNote:MisDL2000Marker,"+"ispositivecontrol,"-"isnegativecontrol,Cisblankcontrol,1:P80081,2:P80166,3:P80306,4:P70059,5:P70167,6:P70188.2.4.4外源基因的检测外源基因的检测包括调控元件的检测和目的基因的检测。转基因植物中最常用到的调控元件为CaMV35S启动子、FMV35S启动子和NOS终止子，基于这几种调控元件的大量使用，对启动子和终止子的检测可作为所检测样品是否为转基因作物的初步判断。由于抗除草剂在我国已获得批准生产加工，因此对EPSPS基因作为靶基因也进行检测。此外耐除草剂大豆GTS40-3-2和MON89788转化体是目前种植面积最广的转基因大豆品种，而且GTS40-3-2和MON89788转化体分别在2004年和2008年首次获得我国农业部颁发的进口安全证书，仅可用于原料加工的进口安全证书，GTS40-3-2含有CaMV35S启动子和NOS终止子，MON89788含有FMV35S启动子和T-E9终止子，本研究基于上述元件的检测结果，根据GTS40-3-2和MON89788转化体侧翼序列和目的基因设计引物做特异性检测，为其定性检测提供技术支撑，因此对两种转化体也进行检测。（1）CaMV35S启动子基因CaMV35S启动子是指来自花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子。20世纪80年代,Chua和洛克菲勒大学的合作者在感染了花椰菜花叶病毒(CaMV)的植物中分离出了一种启动子,该启动子负责花椰菜花叶病毒(CaMV)的整个基因组的转录表达,它的沉降系数是35S,因此,这个启动子?

中国农业科学院硕士学位论文第二章大豆转基因成分检测技术研究14图2-3CaMV35S启动子检测结果注：“M”：DL2000DNAmarker，“+”：阳性对照，“-”：阴性对照，“C”：空白对照，1：P60101，2：P70111，3：P70122，4：P70163，5：P70164，6：P70171，7：P70175。Fig.2-3DetectionresultsofCaMV35SpromoterNote:MisDL2000Marker,"+"ispositivecontrol,"-"isnegativecontrol,Cisblankcontrol,1:P60101,2:P70111,3:P70122,4:P70163,5:P70164,6:P70171,7:P70175.（2）NOS终止子基因NOS终止子是转基因植物中使用最多的终止子。目前，已有39％的转基因商业化作物中含有NOS终止子，如抗草甘膦转基因大豆、抗草甘膦转基因玉米Bt11和GA21等，检测该基因也作为筛选转基因植物的常用方法之一。对706个样品进行全部筛查，最终检测到P60084、P70111、P70150、P70175和P80162含有NOS终止子（图2-4）。图2-4NOS终止子检测结果注：“M”：DL2000DNAmarker，“+”：阳性对照，“-”：阴性对照，“C”：空白对照，1：P60084，2：P70111，3：P70150，4：P70175，5：P80162。Fig.2-4DetectionresultsofNOSterminatorNote:MisDL2000Marker,"+"ispositivecontrol,"-"isnegativecontrol,Cisblankcontrol,1:P60084,2:P70111,3:P70150,4:P70175,5:P70162.（3）FMV35S启动子基因FMV35S启动子基因即玄参花叶病毒35S启动子是植物遗传操作常用标记基因，很多转基因植物（如转基因大豆品系MON89034等）含有FMV35S启动子基因，同时也是检测转基因植物的重要指标。对706个样品进行全部筛查，最终检测到P70059、P70167、P70188、P80081、P80166和P80306含有FMV35S启动子（图2-5）。

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本文编号：3114259