胚胎植入过程中子宫内膜microRNA及靶基因的表达规律

发布时间：2021-04-02 21:47

　　目的:现今在社会、经济等多种因素的影响下不孕症是当下育龄人群面临的一大问题。随着近年来对非编码小RNA的深入研究,miRNA在生殖生物学中的作用逐步被发现。成功的受孕需要优质的胚胎与合适的子宫内膜共同作用,胚胎是否能够植入子宫内膜决定了妊娠结局,因此母胎之间的“交流”一直是生殖医学领域的重要研究方向之一。已发现在胚胎着床期,子宫内膜miRNA存在差异表达,本文寻找差异表达的miR-155、miR-146a所调控的靶基因及其表达规律,探讨miRNA在子宫内膜容受性方面的作用。方法:基于小鼠囊胚在妊娠第4天晚上着床,本实验建立妊娠鼠模型,分别在种植窗口期（妊娠第4、5天）和种植前期（妊娠第1天）取材;为排除胚胎的影响,建立假孕鼠模型,同样在种植窗期（假孕第4、5天）和种植前期（假孕第1天）取材。使用Q-PCR方法检测小鼠子宫内膜组织中miRNA（miR-155、miR-146a）及mRNA（Sirt1、MMP16）的表达水平,Western blotting方法检测小鼠子宫内膜组织中Sirt1及MMP16的表达规律,免疫组化检测MMP16蛋白在子宫内膜组织中的定位及相对表达量。在进行miR... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
研究材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验细胞
    2 主要实验试剂和仪器
        2.1 主要试剂
        2.2 主要仪器
    3 主要实验方法
        3.1 早孕小鼠模型建立
        3.2 假孕小鼠模型建立
        3.3 miRNA agomir体内注射
        3.4 小鼠子宫组织收集
        3.5 细胞培养
        3.6 microRNA合成与转染
        3.7 组织脱水包埋
        3.8 石蜡切片
        3.9 HE染色
        3.10 免疫组化
        3.11 蛋白免疫印迹（Western Blot）
        3.12 Total RNA抽提及质检
        3.13 RNA逆转录
        3.14 实时定量PCR
        3.15 统计分析
结果
    1 动物实验
        1.1 小鼠子宫大体观以及HE染色
        1.2 小鼠子宫组织中miR-155及miR-146a的变化
        1.3 小鼠子宫中Srit1 以及MMP16 的表达
        1.4 miRNA agomir宫角注射后Sirt1和MMP16 的表达变化
        1.5 免疫组化检测小鼠子宫内膜组织中MMP16 的表达
        1.6 Q-PCR检测小鼠子宫内膜组织中Sirt1和MMP16 的表达
    2 人子宫内膜细胞Sirt1和MMP16 蛋白的表达
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
附录
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌体与自身免疫病的研究进展[J]. 于娟,张立平,孙宁,李晓军.  医学研究生学报. 2018(09)
[2]植入前遗传学诊断及筛查技术的实验室质量控制体系[J]. 黄锦,加加林,王云,乔杰.  中华生殖与避孕杂志. 2018(08)
[3]植入前遗传学筛查在高精子DNA碎片指数不育夫妇行ICSI中的应用[J]. 杨斯桀,李婷,刘雯,李世骏,谢楠,张琛,高选,刘晓丹.  中华男科学杂志. 2018(01)
[4]胚胎培养液中血管内皮生长因子的水平及其与IVF-ET结局的关系[J]. 任建枝,蔡嘉力,韩冬梅,李萍,耿洁,马彩辉,韩艳.  东南国防医药. 2016(05)
[5]MicroRNAs在早期胚胎发育中的研究进展[J]. 江胜林,凌秀凤,张军强.  医学研究生学报. 2014(09)
[6]Inhibitory Effects of miR-146b-5p on Cell Migration and Invasion of Pancreatic Cancer by Targeting MMP16[J]. 林凡,王欣,揭志刚,洪晓泉,李旭,王敏,俞亚红.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2011(04)



本文编号：3116017