基于细菌T7 RNA聚合酶的酵母CRISPR-Cas9基因编辑系统的开发

发布时间：2021-04-02 22:39

　　基于Meganucleases,ZFNs,TALENs,和CRISPR/Cas9系统的基因编辑工具已经在大量细胞系以及器官中应用于精确的基因修饰。与以前的基因编辑工具相比较,最近兴起的CRISPR/Cas9基因编辑系统由于其简便性、可定制性以及多功能性,展现出了卓越的优势。最普遍的CRISPR/Cas9基因编辑系统主要由两个元件构成:Cas9核酸酶以及导向RNA。CRISPR/Cas9基因编辑系统在很多领域被寄予厚望,包括基因功能研究,基因治疗,异种器官移植以及动物繁育。很多研究也都在试图解决该系统的瓶颈与挑战。其中,对与靶位点的选择并且产生有生物活性的导向RNA对于该系统的效率以及靶向编辑的精确性具有重大意义,目前已经有许多对于增强靶向单个位点或多个位点的导向RNA的表达量的尝试研究。细菌的T7 RNA聚合酶是一个活性很高并且特异性依赖于其自身T7启动子的RNA聚合酶。酵母,尤其是酿酒酵母,被视为研究很广泛的单细胞真核模式生物。在本实验室,应用T7 RNA聚合酶/T7启动子这套系统,通过PCR技术,在酵母细胞中表达有活性的导向RNA用来指导Cas9进行靶位点的编辑。sgRNA的功能是... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
abstract
摘要
Acknowledgements
Introduction
Chapter 1:Literature review
    1.1 An overview of genetic modification
    1.2 Gene-editing nucleases:from meganucleases to CRISPR/Cas systems
        1.2.1 Meganucleases
        1.2.2 Zinc finger nucleases （ZFNs）
        1.2.3 Transcription activator-like effector nucleases （TALENs）
        1.2.4 Clustered regularly interspaced short palindromic repeats （CRISPR）/ CRISPR-associated proteins （Cas）
    1.3 A glimpse on CRISPR systems: from observed short repetitions to versatile genome editing tools
    1.4 Applications of CRISPR/Cas system in yeast
    1.5 Applications of CRISPR/Cas system in animal
        1.5.1 Sheep
        1.5.2 Goats
        1.5.3 Cattle
        1.5.4 Pigs
        1.5.5 Rabbits
        1.5.6 Chickens
Chapter 2:Using T7-sgRNAs to evaluate the efficiencies of different target sites in yeast
    2.1 Materials and methods
        2.1.1 Strains, plasmids, and media
        2.1.2 Generation of linear T7-sgRNAs
            2.1.2.1 Selection of target sites
            2.1.2.2 Primer design
            2.1.2.3 PCR program
            2.1.2.4 Gel electrophoresis and gel extraction
        2.1.3 Yeast transformation
    2.2 Results
    2.3 Discussion
    2.4 Summary
References
Appendices
About the author
Publications


【参考文献】：
期刊论文
[1]Comparing successful gene knock-in efficiencies of CRISPR/Cas9 with ZFNs and TALENs gene editing systems in bovine and dairy goat fetal fibroblasts[J]. LIU Hui,LIU Chang,ZHAO Yu-hang,HAN Xue-jie,ZHOU Zheng-wei,WANG Chen,LI Rong-feng,LI Xue-ling.  Journal of Integrative Agriculture. 2018(02)
[2]Generation of tryptophan hydroxylase 2 gene knockout pigs by CRISPR/Cas9-mediated gene targeting[J]. Ze Li,Hai-Yuan Yang,Ying Wang,Man-Ling Zhang,Xiao-Rui Liu,Qiang Xiong,Li-Ning Zhang,Yoong Jin,Li-Sha Mou,Yan Liu,Rong-Feng Li,Yi Rao,Yi-Fan Dai.  The Journal of Biomedical Research. 2017(05)
[3]Advances in genetic engineering of domestic animals[J]. Shaohua WANG,Kun ZHANG,Yunping DAI.  Frontiers of Agricultural Science and Engineering. 2016(01)



本文编号：3116092