普鲁兰酶基因及透明颤菌血红蛋白基因在大肠杆菌BL21中的克隆与共表达

发布时间：2021-04-05 03:22

　　普鲁兰酶属于脱支酶的一种,其可以高效并且专一的的切开支链淀粉中的α-1,6-糖苷键,从而切下支链淀粉的整个支链,形成直连淀粉。这个特点决定了普鲁兰酶蛋白在以淀粉为原料的的工业生产活动中,不管是单独使用还是配合其他淀粉酶共同使用,在降低淀粉质类原料的使用量、降低生产成本、减少废弃尾物,保护环境方便具有很高应用价值。与普鲁兰酶高的应用价值不相匹配的是其较高的酶产品的价格,由于普鲁兰酶是淀粉酶类中唯一一种我国还不能自主生产的酶类,能够应用到实际进行工业化生产的高产普鲁兰酶工程菌一直是相关研究的热点。由于普鲁兰酶分子量较大,所以在大肠杆菌中的表达会受到比较大的限制。透明颤菌血红蛋白的表达受到环境中氧气含量高低的调控,可以协助氧气进入细胞,加快氧气在细胞内的传递,在微生物代谢产物的积累方面有积极的作用。实验室保藏了一株可以产生普鲁兰酶蛋白的菌种,本实验通过蛋白质谱与高通量测序相结合的方法,得到普鲁兰酶蛋白的完整编码序列pulA。通过分子克隆技术,使之成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,透明颤菌血红蛋白编码基因vgb与pulA基因通过共生质粒一起在宿主菌中表达。通过酶活性高低对比,vgb基因在... 

【文章来源】：深圳大学广东省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

普鲁兰酶作用普鲁兰糖机制

生物信息分析流程图

保藏菌种上清蛋白与市面所售普鲁兰酶蛋白SDS-PAGE电泳


本文编号：3119038