中国大鲵Mx基因的克

发布时间：2021-04-07 02:56

　　中国大鲵（Chinese giant salamander,Andrias davidianus）是我国二级保护动物,也是世界上现存最大的两栖动物。大鲵属于野生动物从水生动物向陆生动物过渡的物种,其在研究物种起源、进化,生物多样性、基因变异等方面具有重要的科学意义。不仅如此,近年来我国大鲵人工养殖规模的不断扩大,由大鲵虹彩病毒（Chinese giant salamander iridovirus,GSIV）引起的病毒性疾病给大鲵的养殖业造成了巨大的经济损失,因而研究大鲵抗病毒防御机制对其病毒性疾病的防控具有重要的意义。Mx蛋白是由干扰素诱导产生的效应因子,因其具有抵抗黏液病毒的能力而命名编码Mx蛋白的基因为Mx（myxovirus resistance）基因。Mx蛋白广泛存在于脊椎动物与无脊椎动物体内,在各组织内广泛表达,且具有广谱的抗病毒活性。目前,Mx基因在哺乳动物、禽类、鱼类等的研究中都有相关报道,而两栖类动物Mx的抗病毒功能研究鲜有报道。本文以中国大鲵为研究对象,采用RT-PCR技术研究了Mx基因在大鲵不同组织中的表达模式及GSIV感染后在不同组织及细胞中的表达模式;通过构建... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR扩增AdMx基因ORFFig.2-1PCRamplificationresultsofAdMxgeneORF

2.1.2阳性克隆的筛选与酶切鉴定针对目的基因所在区域的凝胶，我们应首先对其进行切胶回收。与此同时，针对胶回收及pEGFP-N1载体的产物，行双酶切操作。而后有效连接酶切产物，并使其在大肠杆菌DH5α中得以转化，在LB固体培养板上对其进行涂抹之后，将其置于37℃的恒温培养箱中，在培养板中有较大单个菌落长出的情况下，将其挑出应用于PCR验证实验，最终的实验结果可参考下图2-2。而后将那些经过扩增，且与预期条带大小一致的菌液送至天一辉远生物科技有限公司进行测序，将测序正确的菌液扩大培养后提取超纯质粒，用于之后的细胞过表达实验。图2-2菌落PCR筛选AdMx基因ORF阳性克隆M：(Marker)DL20004-1；：xORFAdM阳性克隆xforclonespositiveScreening2-2Fig.PCRcolonybacterialbygeneORFAdMxforclonespositiveScreening:4-1(Marker);DL2000:MgeneORFAdM20

图2-4大鲵AdMx和其它物种Mx基因的氨基酸序列比对xofsequenceacidaminotheofalignmentMultipleThe4-2FigotherwithcomparisoninAdMspeciesTheGenBankaccessionnumbersofthealignedsequencesareasfollows：GallusgalluMx：CAA80686.1;HaliotisdiscusdiscusMx：CAA80686.1;XenopustropicalisMx1：XP-012813710;AcipenserdabryanusMx：QCB64364;MusmusculusMx1：NP_034976.1;MusmusculusMx2：NP_038634.1;DaniRerioMxA：XP-017206546;HomosapiensMx1：NP_001171517，HomosapiensMx2：NP_002454;CheloniamydasMx1：EM_P31450.23


本文编号：3122656