莨菪腐胺N-甲基转移酶基因的功能研究
发布时间：2021-04-08 09:37
莨菪（Hyoscyamus niger）属于茄科的药用植物,其整个植株含有托品烷生物碱（Tropane alkaloids,TAs）,主要包括莨菪碱和东莨菪碱,可用来作为抗胆碱药物。由于TAs化学合成成本过高没有商业化前景,因此仍然是从药源植物中进行提取。莨菪碱和东莨菪碱皆可作为抗胆碱药物,但东莨菪碱比莨菪碱的药效更优且副作用小,因此东莨菪碱的经济价值更高。托品烷生物碱在植物中含量很低,代谢工程是培育该类生物碱高产药源植物的重要手段之一,而对TAs生物合成途径的分子生物学和生物化学的研究是开展代谢工程的前题。腐胺N-甲基转移酶（Putrescine N-methyltransferase,PMT）催化腐胺的N-甲基化形成N-甲基腐胺,是尼古丁和TAs等生物碱的重要前体。大量研究表明,PMT是尼古丁生物合成中的第一个限速酶。但是,PMT在TAs生物合成和调节多胺代谢中的研究还有待深入。本研究基于我们实验室自己测定的莨菪转录组数据库（未公布）,筛选到一条编码腐胺N-甲基转移酶的基因,命名为HnPMT。对HnPMT进行生物信息学和表达模式分析;在大肠杆菌中重组并纯化该蛋白,对重组HnPMT采...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
莨菪Fig.1-1Hyoscyamusniger
图 1-2 茄科植物中托品烷生物碱和多胺生物合成途径 (强玮, 2016)红箭头表示托品烷合成途径的反应步骤；黑箭头表示其他代谢途径反应步骤；虚线表示未知或未反应或者是多步反应；↑表示该基因已经在植物中进行超表达；↓表示该基因已经在植物中进行抑Fig. 1-2 The biosynthetic pathway of tropane alkaloids and polyamines in Solanaceaeed arrows represent reaction steps in TAs biosynthetic pathway. Dark arrows represent reaction steps in oosynthetic pathways. Dashed arrows indicate unknown or unidentified reactions or reactions. ↑ representsoverexpression of the gene in TAs-producing species has been conducted. ↓ represents that suppression osilencing of the gene in TAs-producing species has been conducted.
第 4 章 结果与分析第 4 章 结果与分析.1 HnPMT 基因 cDNA 的获得与分析根据已经报道的烟草等物种的 PMT 核苷酸序列，在莨菪转录组数据库（开）中进行本地序列比对，筛选出可能参与 TAs 合成的腐胺 N-甲基转移酶（为 HnPMT），通过设计特异性引物并利用高保真酶进行 PCR 扩增。由琼脂胶电泳的结果（图 4-1A）可知，PCR 特异性扩增产物大小为 1500 bp 左右预期大小相符。胶回收纯化 PCR 产物后，连接 T 载体（pJET1.2）送测序。测序结果，对HnPMT基因cDNA序列进行分析，如图4-1B所示。获得的HnPM cDNA 长为 1534 bp，其编码区为 1014 bp，编码 338 个氨基酸残基的多肽测分子量（MW）为 37 kDa，等电点（pI）为 5.78。
本文编号：3125315
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
莨菪Fig.1-1Hyoscyamusniger
图 1-2 茄科植物中托品烷生物碱和多胺生物合成途径 (强玮, 2016)红箭头表示托品烷合成途径的反应步骤；黑箭头表示其他代谢途径反应步骤；虚线表示未知或未反应或者是多步反应；↑表示该基因已经在植物中进行超表达；↓表示该基因已经在植物中进行抑Fig. 1-2 The biosynthetic pathway of tropane alkaloids and polyamines in Solanaceaeed arrows represent reaction steps in TAs biosynthetic pathway. Dark arrows represent reaction steps in oosynthetic pathways. Dashed arrows indicate unknown or unidentified reactions or reactions. ↑ representsoverexpression of the gene in TAs-producing species has been conducted. ↓ represents that suppression osilencing of the gene in TAs-producing species has been conducted.
第 4 章 结果与分析第 4 章 结果与分析.1 HnPMT 基因 cDNA 的获得与分析根据已经报道的烟草等物种的 PMT 核苷酸序列，在莨菪转录组数据库（开）中进行本地序列比对，筛选出可能参与 TAs 合成的腐胺 N-甲基转移酶（为 HnPMT），通过设计特异性引物并利用高保真酶进行 PCR 扩增。由琼脂胶电泳的结果（图 4-1A）可知，PCR 特异性扩增产物大小为 1500 bp 左右预期大小相符。胶回收纯化 PCR 产物后，连接 T 载体（pJET1.2）送测序。测序结果，对HnPMT基因cDNA序列进行分析，如图4-1B所示。获得的HnPM cDNA 长为 1534 bp，其编码区为 1014 bp，编码 338 个氨基酸残基的多肽测分子量（MW）为 37 kDa，等电点（pI）为 5.78。
本文编号：3125315
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3125315.html
最近更新
教材专著
