甲胎蛋白基因沉默对肝癌细胞迁移黏附能力的影响及其机制
发布时间：2021-04-11 16:20
背景与目的:原发性肝癌（primary liver cancer,PLC）是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤的一种,治疗效果差,每年新增患病人数高达60万例。其起病隐匿且潜伏期长,多数患者发现时已为中晚期,故生存预后差。目前临床上迫切地需要开发有效的治疗方法。甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）是一种来源于胚胎内胚层组织细胞的糖蛋白,是一种胚胎性肿瘤相关蛋白。在大多数肝癌患者血清中呈高表达,除了肝癌,胃癌、胰腺癌和生殖系统的恶性肿瘤也通常伴有小剂量的甲胎蛋白升高。目前已被普遍作为一种辅助肝癌诊断及预测肝癌复发的肿瘤标记物。近年来,关于甲胎蛋白越来越多的研究表明,甲胎蛋白在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭等过程中发挥着广泛的作用,我们本课题的目的就是观察甲胎蛋白（AFP）基因沉默对肝癌细胞迁移黏附能力的影响,并探讨其作用机制。方法:在我们的方法中首先构建p Silencer3.0-H1-AFP质粒,脂质体转染法转染肝癌细胞系EGHC-9901,实验中将转染后的肝癌细胞系EGHC-9901分为3组,实验组（转染p Silencer3.0-H1-AFP质粒）、载体对照组（转染空载...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
免疫印迹检测转染前后EGHC-9901甲胎蛋白表达：收集对数期生长细胞，改良lorry法定量，计算待测样品浓度，电泳，PVDF膜上电转移，脱脂奶粉封闭，敷封闭液稀
showed that the amount of alpha-fetoprotein expression in the experimental group wassignificantly lower than that in the vector control group and the blank control group, thedifference was statistically significant, suggesting that the expression of alpha-fetoprotein wassuccessfully inhibited. * P < 0.05, experimental group vs vector control group or blank controlgroup. The independent experiment was repeated three times.2 沉默 AFP 基因表达对各组细胞迁移能力的影响肿瘤细胞的迁移能力增强是肿瘤侵袭转移的机制之一，本文实验中我们在获得稳定表达 AFP-siRNA 肝癌细胞系 EGHC-9901 后，采用 Transwell 小室检测转染前后细胞趋化迁移能力的变化。以胎牛血清作为趋化因子，镜下随机选取5~8 个视野进行穿膜细胞数计数，结果如图 2 所示，独立试验重复 3 次。实验组穿膜细胞数为 132±16，载体对照组为 335±21，空白对照组为 371±32，实验组与载体对照组、空白对照组相比，P<0.05，差异均有统计学意义，如表 1 所示。这表明沉默 AFP 基因表达能够显著抑制肝癌细胞的迁移能力，从而表明此种效应可能会有效的抑制肿瘤的转移与侵袭。
图 3 细胞聚集实验检测细胞与细胞之间黏附能力：实验组细胞于镜下可见大量的细胞团块状组织，而转染空载体及未处理组可见大量散在的细胞及小的细胞团块。Fig 3 Cell aggregation assay was used to detect the adhesion between cells: A large numbof cell masses were observed in the experimental group under the microscope, while a largnumber of scattered cells and small cell masses were observed in the transfected empty vectogroup and the untreated group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲胎蛋白基因沉默对肝癌细胞迁移黏附能力的影响及其机制[J]. 王莉,贺涛,冯世杰,万百顺,王效谦,张珉,张玲,韩风. 山东医药. 2018(47)
[2]原发性肝癌手术治疗的预后因素分析[J]. 王鹤,何蕾,董家鸿. 海军医学杂志. 2017(01)
[3]肝癌复发的诊断与治疗进展[J]. 王波,钱叶本,罗雪莲,金雯,朱治文. 肝胆外科杂志. 2016(04)
[4]Predictive value of tumor markers in patients with recurrent hepatocellular carcinoma in different vascular invasion pattern[J]. Feng Gao,Heng-Kai Zhu,Yang-Bo Zhu,Qiao-Nan Shan,Qi Ling,Xu-Yong Wei,Hai-Yang Xie,Lin Zhou,Xiao Xu,Shu-Sen Zheng. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2016(04)
[5]沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭[J]. 吴荣寿,邬林泉,李科浩,李恩亮,冯潜,张惊玲. 南方医科大学学报. 2016(02)
[6]AFP、AFP-L3、GP73联合检测对原发性肝癌的诊断价值[J]. 赵树艳,Qin Huang-dao. 中国实验诊断学. 2015(11)
[7]Diagnostic value of AFP-L3 and PIVKA-Ⅱin hepatocellular carcinoma according to total-AFP[J]. Jong Young Choi,Seung Won Jung,Hee Yeon Kim,Myungshin Kim,Yonggoo Kim,Dong Goo Kim,Eun-Jee Oh. World Journal of Gastroenterology. 2013(03)
[8]IL-21对恒河猴SHIV特异性CD8+T细胞毒性效应的影响[J]. 赵长城,高锡强,薛婧,丛喆,张伟伦,苏爱华,陈霆,魏强,秦川. 中国实验动物学报. 2012(05)
[9]肿瘤标志物联合检测对恶性肿瘤诊断价值探讨[J]. 唐翠燕,毕明君,于红梅,陈威,王锦秀. 中国医药科学. 2012(08)
[10]甲胎蛋白诊断原发性肝癌的最佳阈值探讨[J]. 何建伟,曹薇薇,李静,曹文江,程江. 山东医药. 2012(07)
硕士论文
[1]稳定转染候选抑癌基因DMBT1对胆囊癌细胞系GBC-SD生物学行为的影响[D]. 贺涛.复旦大学 2009
本文编号：3131578
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
免疫印迹检测转染前后EGHC-9901甲胎蛋白表达：收集对数期生长细胞，改良lorry法定量，计算待测样品浓度，电泳，PVDF膜上电转移，脱脂奶粉封闭，敷封闭液稀
showed that the amount of alpha-fetoprotein expression in the experimental group wassignificantly lower than that in the vector control group and the blank control group, thedifference was statistically significant, suggesting that the expression of alpha-fetoprotein wassuccessfully inhibited. * P < 0.05, experimental group vs vector control group or blank controlgroup. The independent experiment was repeated three times.2 沉默 AFP 基因表达对各组细胞迁移能力的影响肿瘤细胞的迁移能力增强是肿瘤侵袭转移的机制之一，本文实验中我们在获得稳定表达 AFP-siRNA 肝癌细胞系 EGHC-9901 后，采用 Transwell 小室检测转染前后细胞趋化迁移能力的变化。以胎牛血清作为趋化因子，镜下随机选取5~8 个视野进行穿膜细胞数计数，结果如图 2 所示，独立试验重复 3 次。实验组穿膜细胞数为 132±16，载体对照组为 335±21，空白对照组为 371±32，实验组与载体对照组、空白对照组相比，P<0.05，差异均有统计学意义，如表 1 所示。这表明沉默 AFP 基因表达能够显著抑制肝癌细胞的迁移能力，从而表明此种效应可能会有效的抑制肿瘤的转移与侵袭。
图 3 细胞聚集实验检测细胞与细胞之间黏附能力：实验组细胞于镜下可见大量的细胞团块状组织，而转染空载体及未处理组可见大量散在的细胞及小的细胞团块。Fig 3 Cell aggregation assay was used to detect the adhesion between cells: A large numbof cell masses were observed in the experimental group under the microscope, while a largnumber of scattered cells and small cell masses were observed in the transfected empty vectogroup and the untreated group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲胎蛋白基因沉默对肝癌细胞迁移黏附能力的影响及其机制[J]. 王莉,贺涛,冯世杰,万百顺,王效谦,张珉,张玲,韩风. 山东医药. 2018(47)
[2]原发性肝癌手术治疗的预后因素分析[J]. 王鹤,何蕾,董家鸿. 海军医学杂志. 2017(01)
[3]肝癌复发的诊断与治疗进展[J]. 王波,钱叶本,罗雪莲,金雯,朱治文. 肝胆外科杂志. 2016(04)
[4]Predictive value of tumor markers in patients with recurrent hepatocellular carcinoma in different vascular invasion pattern[J]. Feng Gao,Heng-Kai Zhu,Yang-Bo Zhu,Qiao-Nan Shan,Qi Ling,Xu-Yong Wei,Hai-Yang Xie,Lin Zhou,Xiao Xu,Shu-Sen Zheng. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2016(04)
[5]沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭[J]. 吴荣寿,邬林泉,李科浩,李恩亮,冯潜,张惊玲. 南方医科大学学报. 2016(02)
[6]AFP、AFP-L3、GP73联合检测对原发性肝癌的诊断价值[J]. 赵树艳,Qin Huang-dao. 中国实验诊断学. 2015(11)
[7]Diagnostic value of AFP-L3 and PIVKA-Ⅱin hepatocellular carcinoma according to total-AFP[J]. Jong Young Choi,Seung Won Jung,Hee Yeon Kim,Myungshin Kim,Yonggoo Kim,Dong Goo Kim,Eun-Jee Oh. World Journal of Gastroenterology. 2013(03)
[8]IL-21对恒河猴SHIV特异性CD8+T细胞毒性效应的影响[J]. 赵长城,高锡强,薛婧,丛喆,张伟伦,苏爱华,陈霆,魏强,秦川. 中国实验动物学报. 2012(05)
[9]肿瘤标志物联合检测对恶性肿瘤诊断价值探讨[J]. 唐翠燕,毕明君,于红梅,陈威,王锦秀. 中国医药科学. 2012(08)
[10]甲胎蛋白诊断原发性肝癌的最佳阈值探讨[J]. 何建伟,曹薇薇,李静,曹文江,程江. 山东医药. 2012(07)
硕士论文
[1]稳定转染候选抑癌基因DMBT1对胆囊癌细胞系GBC-SD生物学行为的影响[D]. 贺涛.复旦大学 2009
本文编号：3131578
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3131578.html
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