过表达OsDWF4和OsBZR1基因对水稻产量和品质的影响
发布时间:2021-04-12 02:00
油菜素内酯(BR)是一类对植物生长发育有重要调节作用的甾醇类植物激素。OsDWF4是水稻调控BR生物合成的关键限速酶之一,而OsBZR1是BR信号传导通路中的关键转录因子,介导了 BR与多种不同信号通路的互作。本课题主要研究了不同启动子驱动的OsDWF4和OsBZR1过量表达对水稻产量和品质等性状的影响及其作用机制。期望本研究可帮助完善水稻的BR信号通路及其调控网络,并为培育高产优质的水稻新品种提供重要依据。主要研究结果如下:1、以粳稻品种日本晴不同的组织和发育籽粒为研究材料分析OsDWF4和OsBZR1的表达。检测结果显示OsDWF4基因在水稻叶片中表达最高,在其他组织中的表达差异不明显,而在发育种子中,OsDWF4在种子发育前期和中期(0-15DAF)表达水平基本平稳,在种子发育后期(15-20DAF)表达明显上升。OsBZR1基因在水稻根中表达量最高,其次是叶鞘和茎秆,而在叶片和小苗中表达最低。在发育种子中,OsBZR1基因在种子发育初期(0DAF)表达水平最高,然后随着种子的发育表达逐渐下降。2、将OsDWF4基因克隆到包含水稻胚乳特异性表达启动子Gt1或玉米组成型表达启动子U...
【文章来源】:扬州大学江苏省
【文章页数】:69 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1?BR的生物合成途径〖131??Figure?1?BR?biosynthesis?pathway??1.2?BR信号传导通路??
?21??片段进行酶切。构建至最终载体,连接载体后鉴定为阳性克隆的质粒继续连接??C7?/SPi?/Qw9最终载体(如图5),转化Fast-Tl感受态细胞,涂布带有卡那霉素抗性的固??体LB平板,利用公共引物T7和正向引物两端引物搭配鉴定菌落。使用T7引物进行测??序。??^?Q?SK-gRNA?I?||?U3?proTurgct?sgRNA?xcafTolil?Ti?mm?i?i?1??巧9?|?丨?Z????I??,j?*?i??LlTT?f?§?TOrt??crRKA?i^-;???Nj??VaMV?1??v'TTrTTnr,?^.300^9?Ca.s9?,frtn,na,?r? ̄??Kpnl?Bjunll?I??图5?5^-gm4和/?C7J洲-载体结构图??Figure?5?The?structure?diagrams?of?SK-gRNA?and?pC1300-Cas9.??2.2.3亚细胞定位?i??本实验通过PCR方法扩增获得as5Z/?/基因的CDS?(去除终止密码子),通过??Gateway系统LR反应连入包含GFP基因的/7GF55载体上,并测序验证。具体转化及??观察过程:挑取转化为阳性的农杆菌克隆(GV3101菌株)于4?mL含有相应抗生素的液??体LB中,28°C摇床250rpm培养至OD6〇〇=1.4 ̄1.6,?OD6〇〇=1.5为最佳。吸取所摇菌液??于新的5mL含有相应抗生素的液体LB中
研究中对结实率、千粒重等其他主要产量性状也做了考察。结果显示,与野生型对照??相比,和pt/6/._._OsDfKF4转基因水稻的结实率未表现出显著差异,而千??粒重显著升高(图11)。??A?B??loo?1?1???????????????lllllllllll??Y8?Line?1?Line?2?Line?3?Line?1?Line?2?Line?3?Y8?Line?1?Line?2?Line?3?Line?I?Lmc?2?Line?3??pGtl::OaDWF4?pUbi::OsDWF4?pCtl::OsDWF4?pUbi::OsDWF4??图11分析pGO:.asDF/W和pt/6/::〇yDW7W水稻的结实率和千粒重??Figure?11?Characterization?of?the?seed?setting?rate?and?1000-grain?weight?of?the?OsDWF4?transgenic?lines.??A:结实率;B:千粒重。利用T-Test进行显著性差异分析。**表示极显著差异(P<0.01),?*表示显著差??异(0.01<P<0.05)。??(A)?seed?setting?rate;?(B)?1000-grain?weight.?Significant?difference?analysis?using?Student’s?T-Test.?Double??asterisks?denote?a?highly?significant?difference?using?Student's?T-Test(P?<?0.01)
【参考文献】:
期刊论文
[1]优质与高产水稻品种稻米品质和淀粉RVA谱特征值差异初探[J]. 鲁超,龚克成,李育娟,周丽瑶,范军. 上海农业科技. 2019(01)
[2]水稻萌发过程中油菜素内酯影响淀粉代谢的效应及其机制[J]. 李钱峰,余佳雯,鲁军,熊敏,张昌泉,刘巧泉. 江苏农业科学. 2018(04)
[3]稻米品质性状基因的克隆与功能研究进展[J]. 张昌泉,赵冬生,李钱峰,顾铭洪,刘巧泉. 中国农业科学. 2016(22)
[4]Recent Advances in the Regulation of Brassinosteroid Signaling and Biosynthesis Pathways[J]. Huaxun Ye,Lei Li and Yanhai Yin Department of Genetics,Development and Cell Biology,Iowa State University,Ames,Iowa 50011,USA Department of Genetics,Harvard Medical School,185 Cambridge St,CPZN7250,Boston MA 02114-2790,USA. Journal of Integrative Plant Biology. 2011(06)
本文编号:3132385
【文章来源】:扬州大学江苏省
【文章页数】:69 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1?BR的生物合成途径〖131??Figure?1?BR?biosynthesis?pathway??1.2?BR信号传导通路??
?21??片段进行酶切。构建至最终载体,连接载体后鉴定为阳性克隆的质粒继续连接??C7?/SPi?/Qw9最终载体(如图5),转化Fast-Tl感受态细胞,涂布带有卡那霉素抗性的固??体LB平板,利用公共引物T7和正向引物两端引物搭配鉴定菌落。使用T7引物进行测??序。??^?Q?SK-gRNA?I?||?U3?proTurgct?sgRNA?xcafTolil?Ti?mm?i?i?1??巧9?|?丨?Z????I??,j?*?i??LlTT?f?§?TOrt??crRKA?i^-;???Nj??VaMV?1??v'TTrTTnr,?^.300^9?Ca.s9?,frtn,na,?r? ̄??Kpnl?Bjunll?I??图5?5^-gm4和/?C7J洲-载体结构图??Figure?5?The?structure?diagrams?of?SK-gRNA?and?pC1300-Cas9.??2.2.3亚细胞定位?i??本实验通过PCR方法扩增获得as5Z/?/基因的CDS?(去除终止密码子),通过??Gateway系统LR反应连入包含GFP基因的/7GF55载体上,并测序验证。具体转化及??观察过程:挑取转化为阳性的农杆菌克隆(GV3101菌株)于4?mL含有相应抗生素的液??体LB中,28°C摇床250rpm培养至OD6〇〇=1.4 ̄1.6,?OD6〇〇=1.5为最佳。吸取所摇菌液??于新的5mL含有相应抗生素的液体LB中
研究中对结实率、千粒重等其他主要产量性状也做了考察。结果显示,与野生型对照??相比,和pt/6/._._OsDfKF4转基因水稻的结实率未表现出显著差异,而千??粒重显著升高(图11)。??A?B??loo?1?1???????????????lllllllllll??Y8?Line?1?Line?2?Line?3?Line?1?Line?2?Line?3?Y8?Line?1?Line?2?Line?3?Line?I?Lmc?2?Line?3??pGtl::OaDWF4?pUbi::OsDWF4?pCtl::OsDWF4?pUbi::OsDWF4??图11分析pGO:.asDF/W和pt/6/::〇yDW7W水稻的结实率和千粒重??Figure?11?Characterization?of?the?seed?setting?rate?and?1000-grain?weight?of?the?OsDWF4?transgenic?lines.??A:结实率;B:千粒重。利用T-Test进行显著性差异分析。**表示极显著差异(P<0.01),?*表示显著差??异(0.01<P<0.05)。??(A)?seed?setting?rate;?(B)?1000-grain?weight.?Significant?difference?analysis?using?Student’s?T-Test.?Double??asterisks?denote?a?highly?significant?difference?using?Student's?T-Test(P?<?0.01)
【参考文献】:
期刊论文
[1]优质与高产水稻品种稻米品质和淀粉RVA谱特征值差异初探[J]. 鲁超,龚克成,李育娟,周丽瑶,范军. 上海农业科技. 2019(01)
[2]水稻萌发过程中油菜素内酯影响淀粉代谢的效应及其机制[J]. 李钱峰,余佳雯,鲁军,熊敏,张昌泉,刘巧泉. 江苏农业科学. 2018(04)
[3]稻米品质性状基因的克隆与功能研究进展[J]. 张昌泉,赵冬生,李钱峰,顾铭洪,刘巧泉. 中国农业科学. 2016(22)
[4]Recent Advances in the Regulation of Brassinosteroid Signaling and Biosynthesis Pathways[J]. Huaxun Ye,Lei Li and Yanhai Yin Department of Genetics,Development and Cell Biology,Iowa State University,Ames,Iowa 50011,USA Department of Genetics,Harvard Medical School,185 Cambridge St,CPZN7250,Boston MA 02114-2790,USA. Journal of Integrative Plant Biology. 2011(06)
本文编号:3132385
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