真核表达载体过表达EB病毒潜伏期膜蛋白1基因对人B淋巴瘤细胞株影响的实验研究

发布时间：2021-04-13 13:43

　　目的研究EB病毒（Eepstein-Barr virus,EBV）潜伏期膜蛋白1（latent membrane protein 1,LMP1）对人B淋巴细胞株增殖与周期的影响、对免疫功能调节相关蛋白的调控,并初步探究其作用机制。方法（1）将LMP1序列连入pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP载体,通过电穿孔法转染EBV阴性人B淋巴瘤细胞株Ramos细胞,利用遗传霉素（Geneticin,遗传G418）筛选较为稳定过表达LMP1的Ramos细胞,行RT-PCR与Western Blot检测转染pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP-LMP1后Ramos细胞的LMP1表达情况。（2）利用CCK8法绘制细胞生长曲线,检测细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期分布,qRT-PCR检测促凋亡基因Bax与抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达。（3）Western Blot与免疫荧光法检测干扰素调节因子7（interferon regulatory factor7,IRF7）在细胞中的定量与定位,免疫共沉淀初步筛选LMP1在Ramos细胞中的相互作... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

菌落检测PCR阳性克隆M：DNAmaker1-9：挑取的单克隆感受态细胞

青岛大学硕士学位论文181.3LMP1过表达细胞株建立后绿色荧光观察倒置显微镜下可见转染质粒的细胞表现绿色荧光，细胞状态良好，见图2。图2荧光显微镜下观察转染pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP的Ramos细胞A：白光下B：激发光下1.4质粒转染后LMP1mRNA的表达取水为扩增模板作为阴性对照，可见未扩增出GAPDH、LMP1片段；可见Ramos细胞cDNA能扩增出GAPDH片段而不能扩增LMP1片段；LMP1过表达的细胞可扩增出GAPDH与LMP1片段；LMP1重组质粒作为阳性对照可扩增LMP1未能扩增GAPDH，如图3。图3PCR检测LMP1的表达

PCR检测LMP1的表达

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3135405