miR-135a-5p通过Smad4基因调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖及凋亡

发布时间：2021-04-14 02:23

　　目的探讨微小RNA-135a-5p（miR-135a-5p）通过调控SMAD家庭成员4（Smad4）表达而调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖及凋亡。方法体外培养人卵巢颗粒细胞KGN与人正常卵巢上皮细胞IOSE80,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测miR-135a-5p、Smad4的表达量;分别用anti-miR-con、anti-miR-135a-5p、anti-miR-135a-5p与si-con、anti-miR-135a-5p与si-Smad4转染至卵巢颗粒细胞;甲基噻唑基四唑法（MTT）检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测过表达miR-135a-5p对野生型和突变型Smad4荧光素酶活性的影响;Western blot检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期依赖蛋白激酶2（CDK2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的表达量。结果与正... 

【文章来源】：热带医学杂志. 2020,20(07)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Western blot检测人卵巢颗粒细胞和人正常卵巢上皮细胞中Smad4的表达

与anti-miR-con组比较，anti-miR-135a-5p组细胞活力显著降低，克隆形成数显著减少，Cyclin D1、CDK2蛋白水平显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05），见图2和表2。2.3 干扰miR-135a-5p促进人卵巢颗粒细胞KGN凋亡

starBase预测显示miR-135a-5p与Smad4存在靶向结合位点，见图4A。双荧光素酶报告实验结果显示，共转染野生型载体WT-Smad4的细胞实验中，与miR-con组比较，miR-135a-5p组荧光素酶活性显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）；共转染突变型载体MUT-Smad4的细胞实验中，miR-135a-5p组荧光素酶活性与miR-con组比较差异无统计学意义（P>0.05），见表4。与miR-con组比较，miR-135a-5p组细胞中Smad4蛋白水平显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与anti-miR-con组比较，anti-miR-135a-5p组细胞中Smad4蛋白水平显著升高，差异有统计学意义（P<0.05），见图4B和表5。图4 miR-135a-5p与Smad4存在互补序列

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-1291通过调控锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞周期及增殖的影响[J]. 叶志华,黄耿,付金伦,桂定文.  国际肿瘤学杂志. 2018 (03)



本文编号：3136467