耳聋基因DFNA5截短突变致细胞毒性的研究
发布时间：2021-04-14 21:28
第一部分:DFNA5表达分布及亚细胞定位的研究目的:通过新生大鼠全身多个器官DFNA5表达量检测、大鼠耳蜗冰冻切片和HEI-OC1细胞免疫荧光染色,研究DFNA5在大鼠体内的表达分布及亚细胞定位。方法:取新生1天SD大鼠的肝、肺、肾、脾、心脏、肌肉、脑和耳蜗等组织器官,提取总蛋白质,通过蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测DFNA5在各组织器官中的表达水平;取新生1天SD大鼠耳蜗进行冰冻切片,免疫荧光染色观察DFNA5在耳蜗内的表达分布;免疫荧光染色观察DFNA5在HEI-OC1细胞中的亚细胞定位。结果:大鼠耳蜗、肌肉、脑、脾、心脏、肾、肺和肝等组织器官中均表达DFNA5,其中耳蜗表达量最高;冰冻切片结果显示DFNA5在大鼠耳蜗中内源性表达于毛细胞和螺旋神经节细胞中;传代培养的HEI-OC1细胞内源性表达的DFNA5均匀分布于胞质中。结论:大鼠多个组织器官内源性表达DFNA5,耳蜗中表达水平最高,耳蜗内DFNA5主要表达于毛细胞和螺旋神经节细胞中,HEI-OC1细胞内源性表达的DFNA5主要分布于胞质。第二部分:不同DFNA5片段对哺乳动物细胞毒性作用的研究目的:通过将不同D...
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
野生型和突变型DFNA5及其所表达蛋白质的结构示意图
空军军医大学硕士学位论文-25-聚焦显微镜观察并拍照。3结果3.1DFNA5在大鼠各器官中的表达WesternBlot结果显示大鼠耳蜗、肌肉、脑、脾、心脏、肾、肺和肝等组织器官中均有不同程度DFNA5表达，其中耳蜗表达量最高，在脾、心脏、肺中也有较高水平表达（图2）。图2DFNA5在大鼠各组织器官中的表达水平左图：WesternBlot检测DFNA5在各组织器官内的表达情况；右图：以GAPDH内参标准化的DFNA5表达量。3.2DFNA5在大鼠耳蜗内表达分布冰冻切片anti-DFNA5染色显示大鼠耳蜗中内源性表达DFNA5，利用anti-Parvalbumin特异性标记毛细胞和螺旋神经元细胞胞浆，发现DFNA5在大鼠耳蜗内主要表达于毛细胞和螺旋神经节细胞中（图3）。图3新生SD大鼠耳蜗冰冻切片免疫荧光染色（600×）上图：毛细胞（HCs）；下图：螺旋神经节（SGNs）。
空军军医大学硕士学位论文-25-聚焦显微镜观察并拍照。3结果3.1DFNA5在大鼠各器官中的表达WesternBlot结果显示大鼠耳蜗、肌肉、脑、脾、心脏、肾、肺和肝等组织器官中均有不同程度DFNA5表达，其中耳蜗表达量最高，在脾、心脏、肺中也有较高水平表达（图2）。图2DFNA5在大鼠各组织器官中的表达水平左图：WesternBlot检测DFNA5在各组织器官内的表达情况；右图：以GAPDH内参标准化的DFNA5表达量。3.2DFNA5在大鼠耳蜗内表达分布冰冻切片anti-DFNA5染色显示大鼠耳蜗中内源性表达DFNA5，利用anti-Parvalbumin特异性标记毛细胞和螺旋神经元细胞胞浆，发现DFNA5在大鼠耳蜗内主要表达于毛细胞和螺旋神经节细胞中（图3）。图3新生SD大鼠耳蜗冰冻切片免疫荧光染色（600×）上图：毛细胞（HCs）；下图：螺旋神经节（SGNs）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠内耳圆窗基因导入的实验研究[J]. 朱光洁,徐琳,高下,陈杰,丁小琼,麻晓峰,陆玲,秦小明,周函,崔昕燕. 听力学及言语疾病杂志. 2010(04)
[2]耳后入路圆窗膜显微注射小鼠耳蜗基因转染新途径的研究[J]. 徐延军,胡吟燕,翟所强,孙建和,徐金操,候昭晖,申卫东,于宁,杨仕明,韩东一. 听力学及言语疾病杂志. 2009(03)
[3]细胞焦亡:一种新的细胞死亡方式[J]. 林静,李大主. 国际免疫学杂志. 2011 (03)
本文编号：3138047
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
野生型和突变型DFNA5及其所表达蛋白质的结构示意图
空军军医大学硕士学位论文-25-聚焦显微镜观察并拍照。3结果3.1DFNA5在大鼠各器官中的表达WesternBlot结果显示大鼠耳蜗、肌肉、脑、脾、心脏、肾、肺和肝等组织器官中均有不同程度DFNA5表达，其中耳蜗表达量最高，在脾、心脏、肺中也有较高水平表达（图2）。图2DFNA5在大鼠各组织器官中的表达水平左图：WesternBlot检测DFNA5在各组织器官内的表达情况；右图：以GAPDH内参标准化的DFNA5表达量。3.2DFNA5在大鼠耳蜗内表达分布冰冻切片anti-DFNA5染色显示大鼠耳蜗中内源性表达DFNA5，利用anti-Parvalbumin特异性标记毛细胞和螺旋神经元细胞胞浆，发现DFNA5在大鼠耳蜗内主要表达于毛细胞和螺旋神经节细胞中（图3）。图3新生SD大鼠耳蜗冰冻切片免疫荧光染色（600×）上图：毛细胞（HCs）；下图：螺旋神经节（SGNs）。
空军军医大学硕士学位论文-25-聚焦显微镜观察并拍照。3结果3.1DFNA5在大鼠各器官中的表达WesternBlot结果显示大鼠耳蜗、肌肉、脑、脾、心脏、肾、肺和肝等组织器官中均有不同程度DFNA5表达，其中耳蜗表达量最高，在脾、心脏、肺中也有较高水平表达（图2）。图2DFNA5在大鼠各组织器官中的表达水平左图：WesternBlot检测DFNA5在各组织器官内的表达情况；右图：以GAPDH内参标准化的DFNA5表达量。3.2DFNA5在大鼠耳蜗内表达分布冰冻切片anti-DFNA5染色显示大鼠耳蜗中内源性表达DFNA5，利用anti-Parvalbumin特异性标记毛细胞和螺旋神经元细胞胞浆，发现DFNA5在大鼠耳蜗内主要表达于毛细胞和螺旋神经节细胞中（图3）。图3新生SD大鼠耳蜗冰冻切片免疫荧光染色（600×）上图：毛细胞（HCs）；下图：螺旋神经节（SGNs）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠内耳圆窗基因导入的实验研究[J]. 朱光洁,徐琳,高下,陈杰,丁小琼,麻晓峰,陆玲,秦小明,周函,崔昕燕. 听力学及言语疾病杂志. 2010(04)
[2]耳后入路圆窗膜显微注射小鼠耳蜗基因转染新途径的研究[J]. 徐延军,胡吟燕,翟所强,孙建和,徐金操,候昭晖,申卫东,于宁,杨仕明,韩东一. 听力学及言语疾病杂志. 2009(03)
[3]细胞焦亡:一种新的细胞死亡方式[J]. 林静,李大主. 国际免疫学杂志. 2011 (03)
本文编号：3138047
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3138047.html
最近更新
教材专著
