苹果MdbHLH51和MdbHLH155的基因克隆及其在花青素合成中的作用
发布时间：2021-04-16 17:52
苹果（Malus domestica Borkh.）是一种具有很高经济价值的果树,红色果皮的苹果深受人们喜爱,因此分离与果实着色相关的基因并进一步进行功能验证具有很重要的意义。前期,课题组研究发现‘元帅’苹果中MdbHLH51和MdbHLH155的表达量与花青素含量显著相关,本研究进一步分离了MdbHLH51和MdbHLH155,构建了过表达载体MdbHLH51-GFP和MdbHLH155-GFP,并通过农杆菌介导的方法进行洋葱表皮亚细胞定位分析,苹果果皮瞬时表达和转化‘嘎啦’愈伤组织实验,并成功转入烟草和拟南芥,对MdbHLH51和MdbHLH155在花青素合成中的作用进行了初步研究。主要研究结果如下:1.以‘元帅’苹果果皮的cDNA为模板,通过RT-PCR克隆MdbHLH51（基因序列号:MD01G1155000）和MdbHLH155（基因序列号:MD11G1252200）。MdbHLH51的氨基酸数目是279,开放阅读框837 bp,MdbHLH155的氨基酸数目是416,开放阅读框1248 bp。生物信息学分析表明,对两个转录因子的亚细胞定位预测均定位在细胞核。进化树分析表明,...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
苹果果皮中花青素合成与其他酚类物质合成的关系
苹果MdbHLH51和MdbHLH155的基因克隆及其在花青素合成中的作用91.6技术路线图图1-1本研究技术路线Fig.1-1Theprocedureofresearch
苹果MdbHLH51和MdbHLH155的基因克隆及其在花青素合成中的作用17过RT-PCR克隆得到分别为837bp、1248bp左右的单一特异性条带（图2-1），与预期大小一致。图2-1苹果MdbHLH51和MdbHLH155扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，M：DL2000DNAmarkerFig.2-1PCRamplificationresultonagarosegelofMdbHLH51andMdbHLH155,M:DL2000DNAmarker2.3.2生物信息学分析2.3.2.1MdbHLH51和MdbHLH155蛋白理化性质分析对MdbHLH51和MdbHLH155进行理化性质分析，结果表明，MdbHLH51染色体定位在第1条染色体，氨基酸数目是279，分子量是30265.52，理论等电点是9.22，正电荷残基数是35，负电荷残基数是26，脂肪系数74.16（疏水性蛋白），不稳定系数是53.53（不稳定蛋白），总平均亲水性是-0.327。MdbHLH155染色体定位在第11条染色体，氨基酸数目是416，分子量是46213.63，理论等电点是5.93，正电荷残基数是38，负电荷残基数是48，脂肪系数59.35（疏水性蛋白），不稳定系数是47.57（不稳定蛋白），总平均亲水性是-0.608（表2-3）。蛋白质跨膜区分析和信号肽预测结果表明，MdbHLH51跨膜区的氨基酸个数是0.01579，MdbHLH155跨膜区的氨基酸个数是0.01983，MdbHLH51和MdbHLH155都是膜蛋白，位于细胞膜表面，无信号肽。表2-3理化性质分析Table2-3Physicochemicalpropertiesanalysis
【参考文献】：
期刊论文
[1]毛竹bHLH转录因子的鉴定及其在干旱和盐胁迫条件下的表达分析[J]. 徐秀荣,杨克彬,王思宁,高志民. 植物科学学报. 2019(05)
[2]苹果MdNAC9的克隆及其调控黄酮醇合成功能的鉴定[J]. 孙庆国,姜生辉,房鸿成,张天亮,王楠,陈学森. 园艺学报. 2019(11)
[3]银杏bHLH家族转录因子生物信息学及表达分析[J]. 冯磊,石元豹,汪贵斌,曹福亮. 江苏农业学报. 2019(02)
[4]大豆GmMYB46基因的克隆、定位及表达分析[J]. 黄鹭,黄颜众,轩慧冬,马玲,郭娜,赵晋铭,邢邯. 南京农业大学学报. 2019(02)
[5]苹果CR4基因家族鉴定与表达分析[J]. 吕前前,刘钰玺,李静轩,马宗桓,姜雪峰,王宝林,毛娟,褚明宇,陈佰鸿,左存武. 园艺学报. 2018(10)
[6]梅花花青素苷调控基因PmMYB1的分离及功能分析[J]. 张芹,徐宗大,赵凯,李晓伟,张罗沙,张启翔. 林业科学. 2018(10)
[7]MdMYB10对苹果果皮苯丙氨酸代谢的影响[J]. 张波,曲东,杨惠娟,杨亚洲,王帆,朱珍珍,赵政阳. 园艺学报. 2018(08)
[8]甘薯IbGL3的克隆和表达分析[J]. 徐靖,朱红林,朱家红,符策强,韩义胜,唐力琼,王敏芬,王新华,王效宁. 广西植物. 2018(10)
[9]MdMYB1启动子甲基化对不同色泽类型苹果品种果皮花青苷合成的调控作用[J]. 常博,马长青,刘聪,刘莉,王英,杨亚洲,赵政阳. 分子植物育种. 2018(22)
[10]紫娟茶树叶片不同发育期花青素积累及合成相关基因的表达[J]. 蒋会兵,孙云南,李梅,戴伟东,宋维希,田易萍,夏丽飞,陈林波. 茶叶科学. 2018(02)
博士论文
[1]苹果MdMYB1启动子甲基化对套袋果实着色的调控研究[D]. 马长青.西北农林科技大学 2019
[2]棉花SAUR基因家族分析与功能验证[D]. 李锡花.西北农林科技大学 2017
[3]苹果果皮色泽遗传特性及花青苷合成相关基因的表达分析[D]. 孟蕊.西北农林科技大学 2017
[4]红肉苹果MYB10及其启动子对花青苷合成相关基因的调控作用[D]. 孙晓红.湖南农业大学 2017
[5]荔枝果皮花色素苷生物合成关键调控因子的筛选及其功能验证[D]. 赖彪.华南农业大学 2016
[6]苹果BTB-TAZ蛋白MdBTs调控MdbHLH104影响PMH+-ATP酶的活性和铁的动态平衡[D]. 赵强.山东农业大学 2015
[7]黄麻再生遗传转化体系优化及UGPase、CesA1、CCoAOMT基因克隆与功能鉴定[D]. 张高阳.福建农林大学 2014
[8]苹果MdTTG1、MdMYB9与MdMYB11基因调控花青苷合成的作用机制研究[D]. 安秀红.山东农业大学 2013
[9]苹果bHLH转录因子MdTTL1对低温诱导花青苷合成和果实着色的多途径调控[D]. 谢兴斌.山东农业大学 2011
[10]苹果bHLH基因MdCIbHLH1克隆及功能分析[D]. 冯晓明.山东农业大学 2011
硕士论文
[1]火龙果色素相关bHLH转录因子克隆及功能分析[D]. 管丽婷.贵州大学 2019
[2]红花草莓花色对温度的响应及花色相关基因表达分析[D]. 梁吉昌.沈阳农业大学 2018
[3]苹果TFIIE、ACBP4和MAP70-1基因的克隆与功能鉴定[D]. 马彦妮.甘肃农业大学 2018
[4]拟南芥bHLH转录因子QQ1和QQ2功能的研究[D]. 陈永欢.西北大学 2018
[5]西瓜ClMYB46基因的耐低温功能鉴定及调控作用分析[D]. 曹蕾.华中农业大学 2017
[6]苹果MdMYB4基因表达载体构建、愈伤转化及抗盐性鉴定[D]. 曲常志.山东农业大学 2017
[7]苹果bHLH转录因子家族的鉴定及表达分析[D]. 杨金华.西北农林科技大学 2017
[8]甘薯bHLH基因家族的鉴定与初步分析[D]. 裴苓荃.江苏师范大学 2017
[9]茶树MYB转录因子CsAN1调控花青素的作用机制研究[D]. 孙彬妹.华南农业大学 2016
[10]苹果MdHIRs蛋白与MdJAZs蛋白互作对花青苷积累的调控[D]. 陈可钦.山东农业大学 2014
本文编号：3141896
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
苹果果皮中花青素合成与其他酚类物质合成的关系
苹果MdbHLH51和MdbHLH155的基因克隆及其在花青素合成中的作用91.6技术路线图图1-1本研究技术路线Fig.1-1Theprocedureofresearch
苹果MdbHLH51和MdbHLH155的基因克隆及其在花青素合成中的作用17过RT-PCR克隆得到分别为837bp、1248bp左右的单一特异性条带（图2-1），与预期大小一致。图2-1苹果MdbHLH51和MdbHLH155扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，M：DL2000DNAmarkerFig.2-1PCRamplificationresultonagarosegelofMdbHLH51andMdbHLH155,M:DL2000DNAmarker2.3.2生物信息学分析2.3.2.1MdbHLH51和MdbHLH155蛋白理化性质分析对MdbHLH51和MdbHLH155进行理化性质分析，结果表明，MdbHLH51染色体定位在第1条染色体，氨基酸数目是279，分子量是30265.52，理论等电点是9.22，正电荷残基数是35，负电荷残基数是26，脂肪系数74.16（疏水性蛋白），不稳定系数是53.53（不稳定蛋白），总平均亲水性是-0.327。MdbHLH155染色体定位在第11条染色体，氨基酸数目是416，分子量是46213.63，理论等电点是5.93，正电荷残基数是38，负电荷残基数是48，脂肪系数59.35（疏水性蛋白），不稳定系数是47.57（不稳定蛋白），总平均亲水性是-0.608（表2-3）。蛋白质跨膜区分析和信号肽预测结果表明，MdbHLH51跨膜区的氨基酸个数是0.01579，MdbHLH155跨膜区的氨基酸个数是0.01983，MdbHLH51和MdbHLH155都是膜蛋白，位于细胞膜表面，无信号肽。表2-3理化性质分析Table2-3Physicochemicalpropertiesanalysis
【参考文献】：
期刊论文
[1]毛竹bHLH转录因子的鉴定及其在干旱和盐胁迫条件下的表达分析[J]. 徐秀荣,杨克彬,王思宁,高志民. 植物科学学报. 2019(05)
[2]苹果MdNAC9的克隆及其调控黄酮醇合成功能的鉴定[J]. 孙庆国,姜生辉,房鸿成,张天亮,王楠,陈学森. 园艺学报. 2019(11)
[3]银杏bHLH家族转录因子生物信息学及表达分析[J]. 冯磊,石元豹,汪贵斌,曹福亮. 江苏农业学报. 2019(02)
[4]大豆GmMYB46基因的克隆、定位及表达分析[J]. 黄鹭,黄颜众,轩慧冬,马玲,郭娜,赵晋铭,邢邯. 南京农业大学学报. 2019(02)
[5]苹果CR4基因家族鉴定与表达分析[J]. 吕前前,刘钰玺,李静轩,马宗桓,姜雪峰,王宝林,毛娟,褚明宇,陈佰鸿,左存武. 园艺学报. 2018(10)
[6]梅花花青素苷调控基因PmMYB1的分离及功能分析[J]. 张芹,徐宗大,赵凯,李晓伟,张罗沙,张启翔. 林业科学. 2018(10)
[7]MdMYB10对苹果果皮苯丙氨酸代谢的影响[J]. 张波,曲东,杨惠娟,杨亚洲,王帆,朱珍珍,赵政阳. 园艺学报. 2018(08)
[8]甘薯IbGL3的克隆和表达分析[J]. 徐靖,朱红林,朱家红,符策强,韩义胜,唐力琼,王敏芬,王新华,王效宁. 广西植物. 2018(10)
[9]MdMYB1启动子甲基化对不同色泽类型苹果品种果皮花青苷合成的调控作用[J]. 常博,马长青,刘聪,刘莉,王英,杨亚洲,赵政阳. 分子植物育种. 2018(22)
[10]紫娟茶树叶片不同发育期花青素积累及合成相关基因的表达[J]. 蒋会兵,孙云南,李梅,戴伟东,宋维希,田易萍,夏丽飞,陈林波. 茶叶科学. 2018(02)
博士论文
[1]苹果MdMYB1启动子甲基化对套袋果实着色的调控研究[D]. 马长青.西北农林科技大学 2019
[2]棉花SAUR基因家族分析与功能验证[D]. 李锡花.西北农林科技大学 2017
[3]苹果果皮色泽遗传特性及花青苷合成相关基因的表达分析[D]. 孟蕊.西北农林科技大学 2017
[4]红肉苹果MYB10及其启动子对花青苷合成相关基因的调控作用[D]. 孙晓红.湖南农业大学 2017
[5]荔枝果皮花色素苷生物合成关键调控因子的筛选及其功能验证[D]. 赖彪.华南农业大学 2016
[6]苹果BTB-TAZ蛋白MdBTs调控MdbHLH104影响PMH+-ATP酶的活性和铁的动态平衡[D]. 赵强.山东农业大学 2015
[7]黄麻再生遗传转化体系优化及UGPase、CesA1、CCoAOMT基因克隆与功能鉴定[D]. 张高阳.福建农林大学 2014
[8]苹果MdTTG1、MdMYB9与MdMYB11基因调控花青苷合成的作用机制研究[D]. 安秀红.山东农业大学 2013
[9]苹果bHLH转录因子MdTTL1对低温诱导花青苷合成和果实着色的多途径调控[D]. 谢兴斌.山东农业大学 2011
[10]苹果bHLH基因MdCIbHLH1克隆及功能分析[D]. 冯晓明.山东农业大学 2011
硕士论文
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[2]红花草莓花色对温度的响应及花色相关基因表达分析[D]. 梁吉昌.沈阳农业大学 2018
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[4]拟南芥bHLH转录因子QQ1和QQ2功能的研究[D]. 陈永欢.西北大学 2018
[5]西瓜ClMYB46基因的耐低温功能鉴定及调控作用分析[D]. 曹蕾.华中农业大学 2017
[6]苹果MdMYB4基因表达载体构建、愈伤转化及抗盐性鉴定[D]. 曲常志.山东农业大学 2017
[7]苹果bHLH转录因子家族的鉴定及表达分析[D]. 杨金华.西北农林科技大学 2017
[8]甘薯bHLH基因家族的鉴定与初步分析[D]. 裴苓荃.江苏师范大学 2017
[9]茶树MYB转录因子CsAN1调控花青素的作用机制研究[D]. 孙彬妹.华南农业大学 2016
[10]苹果MdHIRs蛋白与MdJAZs蛋白互作对花青苷积累的调控[D]. 陈可钦.山东农业大学 2014
本文编号：3141896
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