原癌基因CT45A1作为新的基因转录激活物促进肺癌生长和转移

发布时间：2021-04-17 00:03

　　肺癌已成为对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一,其发病率越来越高,五年生存率仅为16%[1]。而肺癌转移（主要是脑转移和骨转移）是导致肺癌病人死亡的主要原因。近年研究揭示,肺癌是一种多基因异常的恶性肿瘤。多种癌基因的异常激活、抑癌基因的失活、及多个原癌基因过表达,在肺癌起始和转移中起着重要作用[2-4]。然而,为何在肺癌中会有如此多的癌基因异常高表达?如何有效地抑制肺癌病人中癌基因高表达,已成为亟需解决的关键科学问题。近年来,我们对肺癌中癌基因高表达的机制进行了研究。虽然人们对细胞内由启动子、转录因子、转录激活物、及RNA聚合酶II（Pol II）组成的复合体（基因转录机器,transcriptional machinery）已有了大量的研究,但是对肺癌中基因转录机器的激活和产生多种癌基因的机理知之甚少。我们发现CT45A1能够诱导500多基因在乳腺癌细胞高表达,使低致瘤性的乳腺癌细胞发生EMT和恶性进化,增强乳腺癌细胞的干性,导致乳腺癌侵袭和肺转移,提出了癌睾抗原CT45A1作为一个新的原癌基因,促进肿瘤发生和转移的新概念,但其作用机制并不清楚[5]。我们通过生物信息学分析揭示,C... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１、肺癌进化的分期与肿瘤相关基因的表达近年来，以癌基因为靶标的肺癌靶向治疗取得了很大进展，人们曾期望癌基因靶向治疗能够大大提高肺癌疗效，但从总体上看上述癌基因和ERK、AKT、STATs

CT45A1 与 c-kit 启动子的活性区域结合，上调 C-kit 启动子活性kit基因的启动子在转录起始位点前 200bp（-200bp）以内，这一区域也是子激活位点的富集区域（图 9A）。我们将 c-kit启动子活性区域（-1至-183, K1）以及在 K1上游约 200bp（-212至-463，命名为 K2）两个片段克隆到素酶报告基因载体 PGL4.17中，并且通过 lip2000转染系统转染至肺癌细-D中，通过化学发光法对其启动子活性进行了检测。结果显示， K1片段强的启动子活性，而 K2片段活性很低（图 9B）。接着，我们用斑点杂交（dot的方法对这一假设进行了验证。将 K1，K2片段点在尼龙膜上，用 CT45A1蛋白与之结合后，加入 CT45A1特异性兔多抗显影检测结合情况。结果显示，与 K1片段与有很强的结合，与 K2片段结合较弱（图 9C），而与阴性对照 DNA不能结合，表明 CT45A1能够直接结合到 c-kit启动子的 K1活性区域。200B

结 果 原癌基因 CT45A1 作为新的基因转录激活物促进肺癌生长和转移5、CT45A1 与 RNA 聚合酶 II(Pol II)相互作用一个基因作为转录激活物，它能与DNA结合，能与转录因子及RNA聚合酶II(Pol)相互作用。我们已经用多种方法证明了 CT45A1能与 DNA结合，与 SP1等关键转录因子结合。那么，它是否能够与 RNA聚合酶 II(PolII)相互作用呢？我们行了以下的探索。首先，我们通过免疫荧光探究了 CT45A1与 PolII在细胞内位上的联系。结果显示，CT45A1定位于细胞核内，PolII也是大部分定位于细核中，他们在物理定位上有相关性，提示它们之间可能存在相互作用（图 11A）。次，我们通过体外的结合实验也证实，它们在化学结构上具有相互作用的可能（图 11B）。最后，我们通过细胞内免疫共沉淀实验证实，它们在细胞内存在相作用（图 11C）。A B


本文编号：3142417