人源IFITM2基因检测方法的建立及EMCV感染对IFITM2基因转录的影响

发布时间：2021-04-18 08:45

　　目的:建立一种干扰素诱导跨膜蛋白2（IFITM2）基因SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,以期为IFITM2基因的动态监测提供有效的检测技术.方法:根据GenBank中公布的IFITM2基因序列设计特异性引物,以质粒pMD18-T-IFITM2为模板进行条件优化,绘制标准曲线,建立IFITM2基因SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行条件优化与评价,用建立的方法对脑心肌炎病毒感染后细胞中IFITM2基因转录水平进行检测.结果:建立的20μL检测体系中IFITM2基因最佳引物浓度为10μM,最佳退火温度为59℃;标准质粒在2.62×10⁵～2.62×10¹⁰copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好线性关系,线性方程y=-3.495 logx+43.12,R²=0.998,且灵敏性、特异性和重复性均较高.应用建立的方法对EMCV感染细胞中IFITM2基因转录水平进行检测,结果显示,在感染早期IFITM2转录水平不变,感染后期转录水平逐渐升高.EMCV感染引起宿主IFITM2基... 

【文章来源】：西北民族大学学报(自然科学版). 2020,41(03)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

IFITM2基因PCR扩增（A）及重组质粒的酶切鉴定（B)

通过引物浓度、退火温度优化得出建立的qPCR方法是反应体系20 μL:SYBR? Select Master Mix 10.0 μL,ddH2O 6 μL,IFITM2 qF/R(10 μmol/L)各1.0 μL,模板 2.0 μL.反应条件:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s,59 ℃ 34 s,40次循环.根据扩增标准曲线得出人源IFITM2基因 SYBR Green I实时荧光定量PCR 检测的最佳引物浓度为10 μmol/L(图2),最佳退火温度为59 ℃(图3).图3 反应温度优化

反应温度优化

【参考文献】：
期刊论文
[1]CD63基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及评价[J]. 包晓婧,张海霞,李琼毅,马玉梅,令瑛,魏嘉,李向茸,徐雷,冯若飞,马忠仁.  中国兽医科学. 2016(09)
[2]干扰素诱导的跨膜蛋白抗病毒作用的研究进展[J]. 陈永坤,朱闻斐,舒跃龙.  病毒学报. 2016(02)
[3]鸡IFITM3基因的序列分析和组织表达特征[J]. 郝方元,董万强,刘俊,任乾,张驰宇.  江苏大学学报(医学版). 2011(02)

硕士论文
[1]SFTSV感染对宿主固有免疫关键分子表达调节及IFITM3对其抑制作用[D]. 赵飞.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[2]天然免疫相关因子对SFTS病毒感染的作用研究[D]. 万佳.中国疾病预防控制中心 2016



本文编号：3145187