FGF13与SHCBP1在非小细胞肺癌A549细胞中的作用及机制研究

发布时间：2021-04-20 03:40

　　成纤维细胞生长因子（FGFs）对细胞的增殖、分化和凋亡起重要的调控作用,并广泛参与组织发育和再生过程。成纤维生长因子13（FGF13）作为FGFs亚家族成员,近年来被发现在多种恶性肿瘤中表达上调,但是在非小细胞肺癌（NSCLC）中的作用和分子机制还有待明确。本文主要探究了FGF13与SHCBP1对A549细胞增殖的影响及其分子调控机制。本研究发现FGF13在A549细胞中有较高的表达水平,表明FGF13可能参与A549细胞增殖过程。因此,分别采用CCK-8、平板克隆形成和细胞免疫荧光实验进行检测。结果发现,下调FGF13的表达能够显著抑制A549细胞增殖,而超表达FGF13后结果与之相反。同时,下调FGF13的表达,Ki67蛋白的阳性率也会明显降低。这些结果证实FGF13与A549细胞增殖密切相关。此外,FGF13的干扰导致A549细胞周期阻滞在G1/S期,相反超表达FGF13可以促进A549细胞周期G1/S期的转换。通过检测G1/S期相关蛋白,发现FGF13诱导的细胞周期阻滞与CyclinE、CDK2、P21和P27的表达有关。另一方面,FGF13可以通过激活AKT/gsk3α/gs... 

【文章来源】：陕西理工大学陕西省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 成纤维生长因子 13（FGF13）
        1.1.1 FGF13基因结构
        1.1.2 FGF13的功能
    1.2 SHC SH2结构域连接蛋白 1（SHCBP1）
        1.2.1 SHCBP1基因结构
        1.2.2 SHCBP1表达与功能
    1.3 蛋白质互作研究进展
    1.4 研究目的及意义
第2章 FGF13在A549细胞中生物学功能研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验对象
        2.1.2 试剂、耗材
        2.1.3 试剂配制
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 实验抗体
        2.1.6 实验引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 转录水平检测FGF13表达
        2.2.2 蛋白水平检测FGF13的表达
        2.2.3 CCK-8 检测A549细胞增殖能力
        2.2.4 平板克隆形成检测A549细胞集落成群能力
        2.2.5 细胞免疫荧光染检测Ki67蛋白的表达
        2.2.6 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 FGF13在A549细胞中高表达
        2.3.2 FGF13干扰和超表达效率检测
        2.3.3 FGF13高表达促进A549细胞增殖
        2.3.4 平板克隆检测A549细胞集落形成能力
        2.3.5 细胞免疫荧光检测Ki67蛋白表达
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 FGF13调控A549细胞周期并激活AKT信号通路
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 试剂、耗材
        3.1.3 试剂配制
        3.1.4 实验抗体
        3.1.5 实验仪器
        3.1.6 实验引物
    3.2 实验方法
        3.2.1 流式细胞术检测细胞周期分布
        3.2.2 转录水平检测细胞周期相关因子表达
        3.2.3 蛋白水平检测AKT信号相关蛋白表达
    3.3 实验结果
        3.3.1 FGF13影响A549细胞周期进程
        3.3.2 FGF13影响细胞周期相关因子表达水平
        3.3.3 FGF13激活AKT信号通路
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 FGF13与SHCBP1存在相互作用
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验细胞
        4.1.2 实验试剂、耗材
        4.1.3 试剂配制
        4.1.4 实验仪器
        4.1.5 实验引物
        4.1.6 实验抗体
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞免疫荧光染色
        4.2.2 FGF13标签载体构建及扩增
        4.2.3 SHCBP1标签载体构建及扩增
        4.2.4 蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）验证FGF13与SHCBP1互作关系
    4.3 实验结果
        4.3.1 FGF13在A549细胞中的定位情况
        4.3.2 SHCBP1在A549细胞中的定位情况
        4.3.3 FGF13和SHCBP1在A549细胞中存在共定位
        4.3.4 FGF13超表达标签载体（pcNDA3.1-Flag -FGF13）构建
        4.3.5 SHCBP1超表达标签载体（pcNDA3.1-HA -SHCBP1）构建
        4.3.6 FGF13与SHCBP1相互作用的验证
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 FGF13与SHCBP1互作对A549细胞增殖的影响
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验细胞
        5.1.2 试剂、耗材
        5.1.3 试剂配制
        5.1.4 实验抗体
        5.1.5 实验仪器
        5.1.6 实验引物
    5.2 实验方法
        5.2.1 CCK-8 检测A549细胞增殖能力
        5.2.2 细胞免疫荧光染检测Ki67蛋白的表达
        5.2.3 转录水平检测SHCBP1的表达
        5.2.4 蛋白免疫印迹（western blot）
    5.3 实验结果
        5.3.1 SHCBP1超表达效率检测
        5.3.2 超表达SHCBP1对A549细胞增殖的影响
        5.3.3 SHCBP1对Ki67蛋白表达的影响
        5.3.4 FGF13与SHCBP1相互作用调控A549细胞增殖
        5.3.5 FGF13与SHCBP1相互作用调控P21、P27和CyclinE1的表达
        5.3.6 FGF13与SHCBP1共同介导P21、P27和CyclinE1的表达
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
参考文献
附录
    附录Ⅰ 实验试剂、耗材
    附录Ⅱ 主要实验仪器
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3148906