森林草莓DDM1基因RNAi干扰载体的构建及功能分析

发布时间：2021-04-20 04:56

　　DNA甲基化对植物的生长发育、器官分化等生物过程有着很重要的影响。研究通过构建森林草莓DDM1基因（Decrease in DNA methylation1）RNA干扰（RNA interference, RNAi）载体,对该基因的功能进行初步探究。以森林草莓的cDNA为模板克隆出基因正向片段DDM1-1和反向片段DDM1-2,然后将其分别连接到内含子的干涉表达载体上,构建RNAi表达载体;再通过冻融法将其转入到根癌农杆菌EHA105感受态细胞中,利用叶盘法进行森林草莓遗传转化;最后通过Gus染色对阳性苗进行鉴定,然后对转基因草莓植株进行了表型观察和FveDDM1基因表达量分析。结果显示,与对照植株相比,转基因植株FveDDM1基因的表达量降低,叶片出现了明显的畸形,叶边缘变窄,缺刻变深。研究结果可为进一步探讨DDM1基因的功能及甲基化对植物叶片生长发育的影响提供一定的基础。 

【文章来源】：生物学杂志. 2020,37(05)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 正向片段DDM1-1的片段的克隆和回收
        1.2.2 中间载体的构建
        1.2.3 反向片段DDM1-2的扩增和DDM1基因干涉表达载体的构建
        1.2.4 草莓外植体的制备
        1.2.5 农杆菌介导的森林草莓的遗传转化
        1.2.6 GUS染色
        1.2.7 实时荧光定量PCR
2 结果与分析
    2.1 森林草莓FveDDM1基因正向片段DDM1-1扩增
    2.2 中间载体的构建
    2.3 FveDDM1基因反向片段DDM1-2扩增和干涉载体的构建
    2.4 转基因草莓株系GUS染色鉴定
    2.5 转基因草莓中甲基化修饰基因FveDDM1的表达分析
    2.6 转基因草莓的表型分析
3 讨论与结论



本文编号：3149018