正义和反义EuCCS联合EuCu/ZnSOD1双基因转化巨尾桉与抗寒性研究

发布时间：2021-04-26 21:41

　　铜锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD,CSD）是植物中主要的活性氧清除剂,CSD的激活主要有CCS依赖途径和非CCS依赖途径。为研究CCS与CSD1在低温胁迫下的关联性,利用双基因植物二元表达载体,构建了过量表达CSD1（细胞质CSD）和CCS的pBD-EuCSD1+CCS以及过量表达CSD1同时CCS沉默的pBD-EuCSD1+antiCCS双基因植物二元表达载体。本文通过优化巨尾桉转化再生体系再生出转pBD-EuCSD1+CCS和pBDEuCSD1+antiCCS巨尾桉,筛选出转基因阳性巨尾桉;比较转基因阳性巨尾桉的抗寒性,筛选得到抗寒性强的转基因巨尾桉;对其进行生理生化研究,探究CCS与巨尾桉抗寒性的关系。结果如下:优化了巨尾桉转化再生体系:采用巨尾桉的茎为再生材料;芽分化培养基为:1/2 MS+0.1 g肌醇+30 g蔗糖+0.05 mg/L TDZ+0.5 mg/LNAA;芽生长培养基为:1/2 MS+0.1 g肌醇+30 g蔗糖+0.3 mg/L 6-BA+0.15 mg/L IBA。通过检测筛选,得到了16株转pBD-EuCSD1+CCS阳性巨尾桉,10株转pBDEuC... 

【文章来源】：华侨大学福建省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第1章 引言
    1.1 ROS研究进展
        1.1.1 ROS的产生和作用
        1.1.2 植物中ROS的清除方式
    1.2 Cu/ZnSOD研究进展
        1.2.1 Cu/ZnSOD的作用机制
        1.2.2 Cu/ZnSOD提高植物的抗逆性与转基因植物
    1.3 CCS研究进展
        1.3.1 CCS的结构
        1.3.2 依赖CCS的 Cu/ZnSOD激活途径
        1.3.3 不依赖CCS的 Cu/ZnSOD激活途径
    1.4 本论文研究意义及课题来源
第2章 巨尾桉转化再生体系的优化
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 最佳芽分化培养基的筛选
        2.2.2 最佳分化材料的优化
        2.2.3 最佳芽生长培养基的筛选
        2.2.4 叶片不定根诱导培养
        2.2.5 芽分化培养
        2.2.6 芽生长培养
    2.3 实验结果
        2.3.1 不同激素对芽分化的影响
        2.3.2 不同再生材料对芽分化的影响
        2.3.3 不同芽生长培养基对芽生长的影响
        2.3.4 生根培养基对巨尾桉生根的影响
    2.4 总结与讨论
第3章 EuCSD1+CCS与 EuCSD1+antiCCS双基因转化巨尾桉
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 土壤农杆菌介导的巨尾桉转化
        3.2.2 转基因巨尾桉DNA水平阳性检测
    3.3 实验结果
        3.3.1 EuCSD1+CCS与 EuCSD1+antiCCS双基因转化巨尾桉
        3.3.2 转基因巨尾桉PCR检测
    3.4 总结与讨论
第4章 转EuCSD1+CCS与转EuCSD1+antiCCS基因巨尾桉抗寒性研究
    4.1 实验材料
    4.2 实验方法
        4.2.1 转基因巨尾桉抗寒性检测
        4.2.2 巨尾桉组培苗驯化
        4.2.3 NBT法检测SOD酶活
        4.2.4 巨尾桉总RNA提取
        4.2.5 QPCR反应
        4.2.6 转基因巨尾桉中木质素含量的测定
    4.3 实验结果
        4.3.1 EuCSD1+CCS和 EuCSD1+antiCCS巨尾桉抗冻性检测
        4.3.2 EuCSD1+CCS和 EuCSD1+antiCCS巨尾桉组培苗驯化
        4.3.3 EuCSD1+CCS和 EuCSD1+antiCCS巨尾桉SOD酶活检测
        4.3.4 EuCSD1+CCS与 EuCSD1+antiCCS巨尾桉中CSD1、CCS、GR的相对表达量分析
        4.3.5 EuCSD1+CCS与 EuCSD1+antiCCS巨尾桉中木质素含量比较分析..
    4.4 总结与讨论
第5章 总结与展望
    5.1 研究总结
    5.2 展望
参考文献
致谢
个人简历、在校期间发表的学术论文与研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达EuCuZnSOD提高巨尾桉的耐寒性研究[J]. 赵艳玲,韩瑶,靳玉蕾.  广西植物. 2018(01)

硕士论文
[1]抗寒低木质素巨尾桉的定向培育研究[D]. 靳玉蕾.华侨大学 2014



本文编号：3162162