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棉花GhPDP基因原核表达条件的优化

发布时间:2021-04-29 13:04
  丙酮酸脱氢酶磷酸酶GhPDP与棉花雄性不育能量调控方面密切相关。为了得到大量有活性的GhPDP蛋白,试验将对目的蛋白原核表达条件进行优化。将编码GhPDP基因的cDNA序列插入pET-22b中构建重组表达载体pET-22b-GhPDP,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)进行IPTG诱导表达,通过单因素试验和正交试验对诱导温度、诱导时间、IPTG终浓度和OD600进行优化,利用SDS-PAGE和GeneTools凝胶分析软件分析目的蛋白的表达量,以摸索目的蛋白可溶性表达的最佳条件。结果显示,成功构建重组表达载体pET-22b-GhPDP;目的蛋白在Transetta(DE3)菌株中表达,表达形式多为包涵体;单因素试验结果表明,在诱导温度20℃、诱导时间为5 h、IPTG终浓度0.10 mmol/L和菌体密度OD600 为0.8条件下,目的蛋白可溶性表达量最高;通过正交分析得出,影响目的蛋白可溶性表达的因素强度由高到低依次为诱导温度、IPTG终浓度、诱导时间及菌体密度OD600。综合单因素试验和正交试验结果,确定诱导... 

【文章来源】:华北农学报. 2020,35(05)北大核心CSCD

【文章页数】:7 页

【文章目录】:
1 材料和方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 主要试剂
    1.2 试验方法
        1.2.1 重组表达载体的构建与鉴定
        1.2.2 GhPDP蛋白表达条件的优化
            1.2.2.1 诱导温度
            1.2.2.2 诱导时间
            1.2.2.3 IPTG终浓度
            1.2.2.4 菌体密度OD600
            1.2.2.5 正交试验设计
            1.2.2.6 正交试验数据分析
2 结果与分析
    2.1 重组表达载体的鉴定
    2.2 目的蛋白表达形式的确定
    2.3 重组蛋白表达条件优化
        2.3.1 不同诱导温度对目的蛋白表达量的影响
        2.3.2 不同诱导时间对目的蛋白表达量的影响
        2.3.3 不同IPTG终浓度对目的蛋白表达量的影响
        2.3.4 不同菌体密度OD600对目的蛋白表达量的影响
        2.3.5 GhPDP蛋白诱导优化条件正交试验
        2.3.6 正交试验数据分析
3 结论与讨论
    3.1 GhPDP原核表达载体的构建与表达
    3.2 诱导温度对目的蛋白表达量的影响
    3.3 IPTG浓度对目的蛋白表达量的影响
    3.4 诱导时间对目的蛋白表达量的影响
    3.5 菌体密度OD600对目的蛋白表达量的影响
    3.6 原核表达的最佳诱导条件


【参考文献】:
期刊论文
[1]小麦CWI-B1的原核表达、纯化与多克隆抗体制备[J]. 黄传臻,刘香利,曹汝菲,赵惠贤.  农业生物技术学报. 2017(07)
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[3]抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定[J]. 张付凯,乔亚奇,王磊,兰丽平,潘家荣.  核农学报. 2012(01)
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[8]烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化[J]. 潘滨,吴建祥,李桂新,周雪平.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2007(01)
[9]可溶性VEGF受体-3原核表达载体的构建与蛋白表达[J]. 杨婉华,汪蕊,陈睿,马湘一,王世宣,卢运萍,马丁.  中国现代医学杂志. 2005(23)
[10]重组人血管内皮抑制素(rh-Endostatin)大肠杆菌表达体系发酵条件的优化[J]. 常国栋,李壮林,秦加阳,马翠卿,罗永章,许平.  生物工程学报. 2005(04)

硕士论文
[1]棉花GhPDC-E1α克隆及调控基因表达模式研究[D]. 康娜娜.山西农业大学 2018



本文编号:3167581

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