枸橼相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶基因调控阿霉素耐药人肝癌细胞系SK-Hep1耐药性的机制

发布时间：2021-04-30 04:25

　　目的探讨枸橼相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶（CIT）对阿霉素（ADM）耐药肝癌细胞耐药性的调控作用及其机制。方法用脂质体将乱序无意义阴性序列（si-NC）、CIT小干扰RNA（si-CIT）转染至耐药细胞; Realtime PCR和Western blotting检测CIT基因、连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、B细胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）、Bcl-2相关X基因（Bax）、细胞色素C（Cyt C）、磷酸酶基因诱导的假定激酶1（PINK1）、常染色体隐性遗传性青少年帕金森综合征致病基因（Parkin）和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅰ/Ⅱ（LC3-Ⅰ/Ⅱ）的表达;细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、流式细胞术和荧光探针（JC-10）染色法检测细胞的抑制率、凋亡和线粒体膜电位。结果耐药细胞中CIT基因表达高于正常细胞,敲减CIT可增强其对ADM的敏感性。敲减CIT促进耐药细胞凋亡和线粒体自噬能力,抑制细胞线粒体膜电位,并上调细胞Bax、PINK1、Parkin和LC3-Ⅰ/Ⅱ及胞质中Cyt C,下调细胞中Bcl-2和线粒体中Cyt C。结论 CIT基因可通过线粒体途径的凋亡和自噬调节阿霉素耐药肝... 

【文章来源】：解剖学报. 2020,51(05)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
材料和方法
    1．材料
    2．方法
        2.1 细胞培养:
        2.2 CCK-8法检测细胞抑制率:
        2.3 Real-time PCR检测细胞中CIT mRNA的表达:
        2.4 Western blotting检测细胞中CIT、XIAP、Bcl-2、Bax、Cyt C、PINK1、Parkin和LC3-Ⅰ/Ⅱ的蛋白表达:
        2.5 流式细胞术检测细胞凋亡率:
        2.6 JC-10染色法检测细胞线粒体膜电位:
        2.7 统计学分析:
结果
    1．肝癌耐药细胞的建立
    2.CIT基因在耐药细胞中的表达
    3．敲减CIT对耐药细胞耐药性的影响
    4．敲减CIT对耐药细胞凋亡的影响
    5．敲减CIT对耐药细胞线粒体膜电位的影响
    6．敲减CIT对耐药细胞线粒体自噬的影响
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]苦参素通过线粒体凋亡通路影响肝癌耐药细胞株HepG2/ADM化学治疗的耐药性[J]. 黄桂柳,冯巍巍,黄赞松,周喜汉,覃月秋.  中华肝脏病杂志. 2019 (03)



本文编号：3168836