分泌型cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞基因表达的调控

发布时间：2021-04-29 23:59

　　蛋白质的磷酸化是最常见的蛋白质翻译后修饰之一,多数蛋白质的磷酸化发生在细胞内,由细胞内蛋白激酶催化完成;细胞外蛋白质酪蛋白的磷酸化也早在1883年就已发现,但使其磷酸化的蛋白激酶却直到130年后才被报道。此后VLK、c-Src酪氨酸激酶等多种分泌型蛋白激酶被陆续发现。我们研究发现,c GMP依赖性蛋白激酶Ⅱ（TypeⅡc GMP-dependent protein kinase,PKGⅡ）也是一种分泌型蛋白激酶。早期研究证明,PKGⅡ可以通过阻断血管内皮细胞生长因子受体（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor,VEGFR）等多种胃癌细胞受体酪氨酸激酶家族成员的激活来抑制由这些RTKs启动的信号转导和与之相关的胃癌细胞增殖、迁移等生物学活动,而分泌到细胞外的PKGⅡ对细胞的作用及作用靶点尚不明确。本文以重组蛋白GST-PKGⅡ直接作用于胃癌细胞,模拟分泌型PKGⅡ的作用模式,在转录组测序分析的基础上,结合实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blotti... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写索引
第一章 绪论
    1.1 分泌型蛋白激酶的研究进展
        1.1.1 蛋白质的磷酸化
        1.1.2 分泌型蛋白激酶及其研究进展
    1.2 PKGⅡ的研究背景
        1.2.1 PKG的种类及分布
        1.2.2 PKGⅡ的结构
        1.2.3 PKGⅡ的活性调节机制
        1.2.4 PKGⅡ的主要生物学功能
        1.2.5 PKGⅡ与肿瘤的联系
        1.2.6 关于PKGⅡ的新发现
    1.3 转录组测序分析技术及其应用
        1.3.1 转录组测序分析技术的发展
            1.3.1.1 第一代测序技术
            1.3.1.2 第二代测序技术
            1.3.1.3 第三代测序技术
        1.3.2 转录组测序分析技术的优势
        1.3.3 转录组测序分析技术在胃肿瘤中的应用
    1.4 本研究的目的和意义
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意义
    1.5 本文的主要研究内容和技术路线
        1.5.1 主要研究内容
        1.5.2 技术路线
第二章 重组PKGⅡ对胃癌细胞基因调节的转录组测序全面分析
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 细胞株
        2.2.2 实验材料和试剂
        2.2.3 主要实验仪器
        2.2.4 主要试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 总RNA的提取及质量检测
        2.3.3 转录组测序
            2.3.3.1 原始数据过滤
            2.3.3.2 数据拼接和组装
        2.3.4 生物信息学分析
            2.3.4.1 Blast对比
            2.3.4.2 基因功能注释及COG分类
            2.3.4.3 GO功能注释
            2.3.4.4 差异表达基因的筛选
            2.3.4.5 差异表达基因的功能注释
    2.4 结果与分析
        2.4.1 转录组测序原始数据统计及质量评估
        2.4.2 All-Unigene基因功能注释
            2.4.2.1 NR库对比注释
            2.4.2.2 All-Unigene COG功能分类
            2.4.2.3 All-Unigene GO功能分类
        2.4.3 差异表达基因的功能富集分析
            2.4.3.1 差异表达基因COG功能分类
            2.4.3.2 差异表达基因GO功能分类
            2.4.3.3 GST-PKGⅡ对胃癌AGS基因表达影响的初步分析
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第三章 GST-PKGⅡ作用下差异表达基因的转录组测序筛选
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 实验材料和试剂
        3.2.3 主要实验仪器
        3.2.4 主要试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 差异表达基因的实时荧光定量PCR验证
        3.3.3 统计学分析
    3.4 结果与分析
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第四章 重组PKGⅡ对胃癌细胞中EGF表达的影响
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 细胞株
        4.2.2 实验材料和试剂
        4.2.3 主要实验仪器
        4.2.4 主要试剂的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞培养
        4.3.2 胃癌细胞总蛋白和核、浆蛋白的抽提及Western blotting
    4.4 结果与分析
        4.4.1 重组PKGⅡ抑制胃癌细胞EGF表达
        4.4.2 生长因子EGF和 VEGF-A促进胃癌细胞EGF表达
        4.4.3 重组PKGⅡ抑制VEGF-A介导的胃癌细胞ERK1/2 磷酸化
        4.4.4 重组PKGⅡ抑制胃癌细胞HIF-1α核转位
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
第五章 结论与展望
    5.1 本论文的主要结论
    5.2 研究展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间已发表文章



本文编号：3168433