中黑盲蝽TryP和PGL基因的克隆及生殖调控功能研究

发布时间：2021-05-05 21:01

　　中黑盲蝽（Adelphocoris suturalis）是我国棉花上的主要害虫,其活动敏捷,易转移导致其防治较难。研究中黑盲蝽生殖调控机制,不仅可以为其防治提供新思路,还可以为新型转基因植物的培育提供备选基因。本研究基于课题组前期获得的转录组测序数据,通过分析差异基因发现中黑盲蝽胰蛋白酶前体基因（trypsin precursor,AsTryP）和类胃蛋白酶原基因（pepsinogen-like,AsPGL）的功能可能与中黑盲蝽生殖力相关,本文将通过RACE、实时荧光定量PCR（qPCR）、RNA干扰（RNAi）等技术分析AsTryP和AsPGL在中黑盲蝽生殖调控过程中的作用。主要结果如下:1.AsTryP的克隆和时空表达分析AsTryP开放阅读框（open reading frame,ORF）区域为873 bp,编码290个氨基酸,理论等电点为5.04,分子量为73.04 kDa。时空表达分析结果显示:AsTryP在4龄若虫中表达量最高,其次是3龄若虫、5龄若虫、8日龄雌虫。8日龄雌虫不同组织中,AsTryP在胸部表达量最高,其次为脂肪体和卵巢。2.AsTryP对中黑盲蝽生殖力的影响... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略简表
第一章 文献综述
    1.1 中黑盲蝽
    1.2 昆虫的生殖调控
        1.2.1 昆虫生殖调控的分子机制
        1.2.2 中黑盲蝽生殖调控的研究进展
    1.3 RNA干扰
        1.3.1 RNA干扰机制及特点
        1.3.2 昆虫导入dsRNA的方法
        1.3.3 RNAi在昆虫中的应用
    1.4 研究目的与意义
    1.5 研究内容及技术路线
        1.5.1 研究内容
        1.5.2 技术路线图
第二章 AsTryP的克隆与序列分析
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果
        2.3.1 AsTryP的克隆及序列分析
        2.3.2 AsTryP实时荧光定量PCR引物特异性分析
        2.3.3 AsTryP时空表达模式分析
    2.4 讨论
第三章 AsTryP对中黑盲蝽生殖力的影响
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 结果
        3.3.1 AsTryP沉默效率检测
        3.3.2 AsTryP沉默后雌虫卵巢内卵的数量和生殖力变化情况
    3.4 讨论
第四章 AsPGL的克隆与序列分析
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 结果
        4.3.1 AsPGL的克隆及序列分析
        4.3.2 AsPGL实时荧光定量PCR引物特异性分析
        4.3.3 AsPGL时空表达模式分析
    4.4 讨论
第五章 AsPGL对中黑盲蝽生殖力的影响
    5.1 前言
    5.2 材料与方法
    5.3 结果
        5.3.1 AsPGL沉默效率检测
        5.3.2 AsPGL沉默后雌虫卵巢内卵的数量和生殖力变化情况
    5.4 讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆棉花害虫发生演替与综合防治研究进展[J]. 潘洪生,姜玉英,王佩玲,刘建,陆宴辉.  植物保护. 2018(05)
[2]RNA干扰的研究及应用[J]. 张红丽,胡亮,张智州.  医学理论与实践. 2018(12)
[3]胃肠道微生态平衡对胃癌前病变及胃蛋白酶原影响的研究[J]. 黄光鸿,梁崇芬,姚民武,钟文英.  吉林医学. 2017(11)
[4]南阳棉田中黑盲蝽发生情况及防治措施[J]. 王建玉,张秀阁,宋江春,李拴柱,乔建礼.  农业科技通讯. 2017(07)
[5]短时高温暴露对绿盲蝽和中黑盲蝽存活及生殖的影响[J]. 李国平,封洪强,黄博,钟景,田彩红,邱峰,黄建荣.  生态学报. 2017(11)
[6]昆虫RNA干扰中双链RNA的转运方式[J]. 刘吉升,朱文辉,廖文丽,卜晓玲,江婉仪.  昆虫学报. 2016(06)
[7]活性中心突变型胃蛋白酶原的酵母表达及高效激活研究[J]. 刘宇,郭辉,高晓梦,张艳芳,徐甲坤,董平,梁兴国.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2016(07)
[8]3种鳜鱼生长与摄食量、胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达相关分析[J]. 李传阳,许淼洋,THAMMARATSUNTORN Jeerawat,赵金良,钱叶洲,吴超,钱德.  上海海洋大学学报. 2016(01)
[9]基因沉默的工具-RNA干扰技术的研究进展[J]. 赵雪萌,余祖江.  河南医学研究. 2015(01)
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博士论文
[1]中黑盲蝽信息素合成相关基因的筛选及功能分析[D]. 罗静.华中农业大学 2017

硕士论文
[1]梨小食心虫幼虫中肠胰蛋白酶活性、表达量及与生长发育的关系研究[D]. 赵爱平.西北农林科技大学 2017
[2]东方粘虫中肠胰蛋白酶基因上游启动子核心序列的克隆及功能验证[D]. 刘骉.西北农林科技大学 2017
[3]小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因的克隆、转录及其酶活的研究[D]. 祝妮.浙江大学 2013
[4]萍乡红鲫胰蛋白酶提取纯化及酶原前体cDNA克隆、序列分析[D]. 花育旗.南昌大学 2010
[5]中黑盲蝽性信息素释放节律及其活性组分的初步鉴定[D]. 鲁冲.华中农业大学 2010



本文编号：3170578