大鼠β-arrestin2基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定

发布时间：2021-05-06 06:18

　　目的:构建大鼠β-抑制蛋白2（β-arrestin2）基因过表达慢病毒载体并鉴定。方法:取Pubmed数据库中大鼠β-arrestin2的c DNA序列合成引物,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增获取大鼠β-arrestin2基因;采用琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收PCR产物并对其进行纯化;取限制性内切酶Bam HI/Age I酶切载体质粒和纯化后的PCR产物,将二者实施连接后转化感受态细胞,挑取菌落进行PCR鉴定,并对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对抽提质粒;将β-arrestin2重组质粒与慢病毒辅助包装质粒共转染至293T细胞,获取病毒粗提液并进行扩增、纯化,稀释法测定病毒滴度、荧光显微镜下观察慢病毒感染效率。结果:PCR扩增所得产物大小为1 274 bp,与Pubmed数据库中该基因片段大小一致;阳性转化子的PCR产物大小为728 bp,对比Pubmed数据库中大鼠Arrb2基因序列,上下游引物基因序列大小与转化子PCR产物结果一致;慢病毒包装完成后病毒滴度为5×1011TU/L,病毒感染效率较高。结论:成功构建了携带大鼠β-arrestin2基因的慢病毒载体,目的基因在转染细胞内能... 

【文章来源】：贵州医科大学学报. 2020,45(09)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒和病毒
        1.1.2 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因片段的获取
        1.2.2 建立、鉴定和重组质粒法
        1.2.3 鉴定包装慢病毒和感染效率
2 结果
    2.1 获得和鉴定目的基因片段
    2.2 鉴定GV492-Arrb2重组质粒转化子
    2.3 病毒的滴度和感染效率
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]人肝细胞生长因子融合基因慢病毒载体的构建及鉴定[J]. 徐宠俊,林群.  慢性病学杂志. 2020(06)
[2]脑源性神经生长因子过表达慢病毒载体构建及转染脂肪干细胞的研究[J]. 应诚诚,王勇,李国灏,陈琳,郭永连.  中华实验外科杂志. 2019 (05)
[3]基因修饰干/祖细胞在心肌梗死后心脏血管再生中的研究进展[J]. 陶嘉萍,黄锋,黄伟强.  实用医学杂志. 2018(24)
[4]偏向β-抑制蛋白的GPCR信号传导机制及药物研究进展[J]. 殷琳,陈熙,杨秀颖,杜冠华.  药学学报. 2019(01)



本文编号：3171408