暴马桑黄MVD基因cDNA全长克隆及表达特性分析

发布时间：2021-05-06 18:26

　　【目的】对暴马桑黄中参与三萜合成途径的关键酶——甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶（MVD）基因进行克隆及表达特性分析,以了解暴马桑黄三萜合成的调控机制。【方法】利用生物信息学软件对MVD基因cDNA序列进行分析,并采取同源重组方法构建原核表达载体。用qRT-PCR技术分析MVD基因在暴马桑黄不同发育阶段表达特性;以分光光度计法测定暴马桑黄在不同发育阶段的三萜含量和变化规律。【结果】暴马桑黄MVD基因cDNA序列全长1 209 bp,编码402个氨基酸,相对分子质量为43.43 ku,命名为SbMVD（登录号为MK977617）。系统进化树表明:暴马桑黄MVD蛋白和紫芝、灰树花MVD蛋白同源性最高。SDS-PAGE结果显示:在65 ku（包含21 ku标签蛋白）附近出现与预期大小一致的目的蛋白条带。qRT-PCR分析及三萜含量测定结果表明:暴马桑黄SbMVD基因转录水平和三萜含量在不同发育阶段呈先升后降的变化趋势,并且两者变化趋势基本一致。【结论】通过对SbMVD基因的克隆及表达特性分析,推测该基因在三萜合成途径中发挥一定作用,为进一步研究该基因在暴马桑黄三萜合成过程中的功能奠定了基础。 

【文章来源】：南京林业大学学报(自然科学版). 2020,44(04)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株和载体
    1.2 试验试剂
    1.3 实验引物
    1.4 SbMVD基因克隆
    1.5 SbMVD基因序列分析
    1.6 原核表达载体构建
    1.7 SbMVD基因的诱导表达及检测
    1.8 荧光定量分析及三萜含量测定
        1.8.1 材料收集
        1.8.2 SbMVD基因转录水平分析
        1.8.3 三萜含量测定
2 结果与分析
    2.1 SbMVD基因克隆
    2.2 SbMVD基因序列及蛋白结构特征
        2.2.1 SbMVD基因序列
        2.2.2 SbMVD蛋白跨膜区预测
        2.2.3 SbMVD蛋白信号肽预测
        2.2.4 SbMVD蛋白高级结构预测
        2.2.5 系统进化树构建
    2.3 重组质粒的获得
    2.4 SbMVD基因原核表达
    2.5 SbMVD基因转录水平与三萜含量的变化
        2.5.1 不同发育阶段SbMVD基因转录水平的变化
        2.5.2 不同发育阶段暴马桑黄三萜含量的变化
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]黑木耳内切葡聚糖酶基因克隆与原核表达[J]. 孙健,孙婷婷,王旭彤,邹莉.  吉林农业大学学报. 2019(03)
[2]滇重楼甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的分子克隆与分析[J]. 杨莉,樊小莉,刘琴,王芳,刘静,徐智斌,冯波,周强,王涛.  中草药. 2019(06)
[3]洋常春藤甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因HhMVD的克隆与表达分析[J]. 孙化鹏,钟晓红,乔飞.  热带作物学报. 2018(11)
[4]茶树甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因CsMVD的克隆与表达分析[J]. 王鹏杰,陈丹,曹红利,陈静,陈笛,叶乃兴.  西北植物学报. 2017(12)
[5]金钗石斛焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因的克隆及表达分析[J]. 李清,李标,郭顺星.  基因组学与应用生物学. 2018(02)
[6]重瓣百合LiSEP3基因克隆与表达分析[J]. 隋娟娟,李晓昕,杨秋燕,吴泽,曹兴,何俊娜,义鸣放.  南京林业大学学报(自然科学版). 2017(01)
[7]鲍姆纤孔菌总三萜的提取及其体外抗乳腺癌细胞MCF-7活性[J]. 张林芳,孙婷婷,邹莉.  药物评价研究. 2015(05)
[8]药用真菌桑黄的研究进展[J]. 张维博,王家国,李正阔,杨丽群,秦俭,向仲怀,崔红娟.  中国中药杂志. 2014(15)
[9]刺五加甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的克隆与表达分析[J]. 邢朝斌,龙月红,何闪,周秘,修乐山.  西北植物学报. 2012(10)

博士论文
[1]桑黄三萜生物合成途径关键酶基因的挖掘及分析[D]. 孙婷婷.东北林业大学 2017
[2]人参皂苷生物合成关键酶基因MVD和βAS的克隆及βAS的反义表达[D]. 侯春喜.吉林大学 2009

硕士论文
[1]药用真菌桑黄化学成分的研究[D]. 丁云云.安徽医科大学 2017
[2]灵芝甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的克隆及表达特性研究[D]. 秦磊.南京农业大学 2009



本文编号：3172409