日本三角涡虫Caspase家族基因的功能研究

发布时间：2021-05-10 10:01

　　凋亡是有机体细胞自主程序性死亡方式之一,是生物体正常的生理机能。再生主要指生物体组织或器官遭受损伤后,重建恢复的过程。淡水涡虫具有较强的再生能力,但是,细胞凋亡在涡虫组织再生过程中的作用以及两者之间关系报道较少。本文以再生能力较强的日本三角涡虫（Dugesia japonica）为实验材料,从转录组数据库选择了4个凋亡基因DjCasp3a、DjCasp3b、DjCasp3c和DjCasp8a,利用多种生物学软件对4个基因及其编码蛋白进行生物信息学分析;利用Real-time PCR、RNAi、TUNEL染色、H3P免疫荧光等分子生物学技术,对4基因在整体涡虫及再生过程的作用进行了研究。生物信息学分析结果表明:DjCasp3a和DjCasp3c编码的凋亡蛋白均含有保守的五肽序列QACRG,DjCasp3b和DjCasp8a编码的凋亡蛋白五肽序列分别为QACKG和DACRG。4基因编码蛋白均为亲水性稳定蛋白;没有跨膜结构和分泌信号肽,因此都不属于膜蛋白及分泌蛋白;亚细胞定位显示它们均位于细胞质中。Real-time PCR结果表明:在涡虫再生过程中4基因呈动态表达,在再生3小时,DjCas... 

【文章来源】：河南师范大学河南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 涡虫概述
    1.2 涡虫再生的方式
    1.3 细胞凋亡及其相关的酶
    1.4 细胞凋亡途径
    1.5 凋亡在涡虫中研究进展
    1.6 细胞凋亡与细胞增殖的关系
    1.7 立题依据及意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 实验所用引物
    2.3 基因克隆及RNAi喂食方法
    2.4 RNA提取和Real-time PCR
    2.5 原位杂交、TUNEL染色和H3P免疫荧光
    2.6 生物信息学分析
第三章 实验结果
    3.1 凋亡蛋白Caspase家族基因生物信息学分析
        3.1.1 DjCasp3a生物信息学分析
        3.1.2 DjCasp3b生物信息学分析
        3.1.3 DjCasp3c生物信息学分析
        3.1.4 DjCasp8a生物信息学分析
        3.1.5 DjCasp3 基因同源性分析
    3.2 四凋亡基因在再生期间表达模式
        3.2.1 DjCasp3a在涡虫再生过程中的表达模式
        3.2.2 DjCasp3b在涡虫再生过程中的表达模式
        3.2.3 DjCasp3c在涡虫再生过程中的表达模式
        3.2.4 DjCasp8a在涡虫再生过程中的表达模式
        3.2.5 四凋亡基因在再生过程中的表达趋势
    3.3 四凋亡基因整体原位杂交
    3.4 RNA干扰喂食策略及干扰效果检测
        3.4.1 喂食策略
        3.4.2 四凋亡基因干扰效果检测
    3.5 四基因RNA干扰结果
        3.5.1 DjCasp3a RNA干扰后涡虫形态变化
        3.5.2 DjCasp3a RNA干扰后涡虫标记基因检测
        3.5.3 DjCasp3b RNA干扰后涡虫形态变化
        3.5.4 DjCasp3b RNA干扰后涡虫标记基因检测
        3.5.5 DjCasp3c RNA干扰后涡虫形态变化
        3.5.6 DjCasp3c RNA干扰后涡虫标记基因检测
        3.5.7 DjCasp8a RNA干扰后涡虫形态变化
        3.5.8 DjCasp8a RNAi涡虫标记基因检测
    3.6 日本三角涡虫TUNEL检测
        3.6.1 正常涡虫TUNEL检测
        3.6.2 凋亡基因干扰后整体涡虫TUNEL检测
        3.6.3 干扰涡虫切割后3 小时TUNEL检测
        3.6.4 干扰涡虫切割后72 小时TUNEL检测
    3.7 四基因干扰后整体涡虫H3P免疫荧光
        3.7.1 干扰涡虫整体H3P检测
        3.7.2 干扰涡虫切割后3 小时H3P检测
        3.7.3 四基因干扰涡虫切割后72 小时H3P检测
第四章 讨论
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]日本三角涡虫无性繁殖系Dugesia ZB-1的建立[J]. 徐振彪,韩亚红,宋林霞.  中国实验动物学报. 2017(02)
[2]体外培养状态下心肌细胞有丝分裂的证据[J]. 李辞霞,卢杏,郭志坤.  解剖学报. 2015(01)
[3]细胞凋亡途径及其机制[J]. 李敏,林俊.  国际妇产科学杂志. 2014(02)
[4]Caspase-3细胞定位信号的检测与分析[J]. 卢智勇,卢智刚,曾昭淳.  中国生物化学与分子生物学报. 2008(06)
[5]信号肽序列及其在蛋白质表达中的应用[J]. 郑斌,詹希美.  生物技术通讯. 2005(03)
[6]死亡底物PARP与细胞凋亡[J]. 赛燕.  免疫学杂志. 2002(S1)
[7]Caspase-3与细胞凋亡的研究[J]. 张晓田.  医学综述. 2002(11)

博士论文
[1]日本三角涡虫Neurotrophin信号通路关键基因及flotillins基因的克隆及功能分析[D]. 程方方.河南师范大学 2016



本文编号：3179171