黄河鲤Gsdfs基因结构、表达模式及其与miRNA靶标关系的分析

发布时间：2021-05-11 05:23

　　TGF-β（transformation growth factor-β,TGF-β）超家族在脊椎动物的生殖、发育、生长等方面都有着重要的作用,Gsdf是TGF-β超家族的新成员,其仅仅在鱼类中存在,并且在大多数的硬骨鱼类的性腺中特异性表达,成为鱼类性别决定基因研究的一个强有力的候选基因,因此本实验对黄河鲤中Gsdf基因从结构到功能进行了初步的研究。本研究首先从实验室构建的黄河鲤（Cyprinus carpio var）转录组库中筛选出Gsdf基因序列,之后通过DNAman比对、Blast搜索、PCR测序验证等方法确定2个正确的全长序列:Gsdf1,全长1444 bp,编码154个氨基酸,有TGF-β结构域以及8个保守的半胱氨酸残基,含有4个外显子和3个内含子;Gsdf2,全长1355 bp,编码191个氨基酸,有TGF-β结构域以及8个保守的半胱氨酸残基,含有5个外显子和4个内含子。氨基酸序列比对结果显示黄河鲤的Gsdf1、Gsdf2和斑马鱼（Barchydanio rerio var）的Gsdf相似性最高,分别为49.3%和57.0%,但是和红鳍东方鲀（Takifugu rubri... 

【文章来源】：河南师范大学河南省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 鱼类的性别决定
        1.1.1 鱼类的性染色体类型
        1.1.2 鱼类的性别决定的相关环境因素
        1.1.3 鱼类的性别决定基因
    1.2 Gsdf(gonadal soma-derived factor)的研究进展
        1.2.1 TGF-β超家族的概述
        1.2.2 Gsdf的结构
        1.2.3 Gsdf的功能研究
    1.3 MicroRNA的研究进展
        1.3.1 miRNA的概述
        1.3.2 miRNA与靶基因的相互作用机制
        1.3.3 miR-22的研究进展
        1.3.4 miR-210的研究进展
    1.4 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物-黄河鲤
        2.1.2 细胞系、宿主菌株和载体质粒
        2.1.3 仪器设备
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 主要溶液的配制
        2.1.6 实验中所用引物
    2.2 方法
        2.2.1 Gsdfs基因的生物信息学分析
        2.2.2 RNA的提取和c DNA的合成
        2.2.3 Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)及数据分析
        2.2.4 原位杂交
        2.2.5 miRNA与靶基因关系的验证
        2.2.6 黄河鲤Gsdf1多克隆抗体的制备
        2.2.7 miRNA mimics对离体性腺中Gsdf1表达的影响
        2.2.8 统计学分析
3 结果
    3.1 黄河鲤Gsdfs基因的生物信息学分析
        3.1.1 Gsdfs基因的序列的验证
        3.1.2 Gsdfs基因的序列分析
        3.1.3 Gsdfs基因氨基酸序列同源性分析
        3.1.4 Gsdfs基因染色体同线性分析
        3.1.5 Gsdfs基因转录因子结合位点分析
    3.2 黄河鲤Gsdfs基因表达模式分析
        3.2.1 黄河鲤Gsdfs基因在胚胎中的表达模式
        3.2.2 Gsdfs基因的时空表达模式
    3.3 黄河鲤Gsdfs基因表达定位分析
        3.3.1 黄河鲤Gsdfs mRNA在成熟性腺中的定位
        3.3.2 黄河鲤Gsdfs mRNA胚胎整体原位杂交结果
    3.4 miRNA与Gsdf1基因靶标关系的验证
        3.4.1 miRNA与Gsdf1基因靶标关系的离体验证
        3.4.2 Gsdf1基因与miRNA表达相关性分析
        3.4.3 miRNA mimics对离体性腺中Gsdf1表达的影响
4 讨论
    4.1 黄河鲤Gsdfs基因的生物信息学分析
    4.2 黄河鲤Gsdfs基表达模式及功能预测
    4.3 黄河鲤中miRNA与Gsdf1基因靶标关系的验证
参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析[J]. 闫红伟,田雨顺,姜丽楠,王连顺,刘洋,刘奇,刘圣聪.  大连海洋大学学报. 2016(02)
[2]MicroRNA-195与Smad7靶向关系的研究[J]. 孔彪,沈冬丽,芮涛,张国辉.  江苏大学学报(医学版). 2015(04)
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[4]microRNA与血液系统肿瘤的研究进展[J]. 周珏宇,马文丽,郑文岭.  医学分子生物学杂志. 2006(02)
[5]温度对泥鳅和大鳞副泥鳅性腺分化的影响和CYP19a基因的克隆与时空表达[J]. 南平,杜启艳,燕帅国,常重杰.  中国水产科学. 2005(04)
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硕士论文
[1]双荧光素酶报告基因检测miR-185与AKT1靶标关系[D]. 曹大龙.蚌埠医学院 2015
[2]罗非鱼gsdf在性腺的表达及其在性别决定中的功能[D]. 杨惠惠.西南大学 2014



本文编号：3180805