棉铃虫JNK和p38 MAPK基因的克隆及在响应UV-A胁迫机制中的作用研究

发布时间：2021-05-20 06:06

　　丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,参与介导细胞生长、发育、分裂和分化等多种生理及病理过程。本研究分别克隆获得了棉铃虫Helicoverpa armigera丝裂原活化蛋白激酶家族的重要成员c-Jun氨基末端激酶基因（HaJNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶基因（Hap38 MAPK）并对其进行序列和表达模式分析,利用RT-qPCR、RNAi等技术研究了这两个基因在棉铃虫响应UV胁迫中的作用。相应结果如下:1.棉铃虫c-Jun氨基末端激酶基因HaJNK的克隆及表达谱分析利用RT-PCR与RACE技术克隆获得一个棉铃虫JNK基因并命名为HaJNK（GenBank登录号:MH719009）,其cDNA序列全长为2 431 bp,开放阅读框（ORF）长1 191 bp,编码396个氨基酸,编码蛋白质的相对分子量为45.01 kD,等电点为6.35,无跨膜结构,无信号肽。系统进化分析显示,棉铃虫HaJNK与其他昆虫JNK具有很高的相似性。不同发育阶段表达分析表明,HaJNK在棉铃虫卵、1-6龄幼虫、蛹、雌成虫和雄成虫均有表达,在卵期表达量最高;组织特异性分析显... 

【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 紫外光(UV)与昆虫
    2 MAPK信号通路研究
        2.1 JNK信号转导通路
        2.2 p38 MAPK信号转导通路
    3 RNAi在昆虫中的研究进展
        3.1 RNAi的作用机理
        3.2 RNAi在昆虫研究中的应用
    4 抗氧化酶系统研究
    5 立题依据
第二章 棉铃虫HaJNK基因的克隆及表达谱分析
    1 实验材料
        1.1 供试虫源
        1.2 供试样品
        1.3 棉铃虫幼虫饲料配方
        1.4 主要仪器
        1.5 主要试剂
        1.6 溶液配制和培养基
    2 实验方法
        2.1 棉铃虫总RNA的提取
        2.2 中间片段的克隆
        2.3 3'端和5'端序列获得
        2.4 克隆测序
        2.5 生物信息学分析
        2.6 时空表达分析
        2.7 数据统计与分析
    3 结果与分析
        3.1 棉铃虫总RNA的提取
        3.2 HaJNK基因的克隆和序列分析
        3.3 HaJNK同源性比对及系统发育分析
        3.4 HaJNK基因的表达模式分析
    4 讨论
第三章 棉铃虫HaJNK在响应UV-A胁迫机制中的作用研究
    1 实验材料
        1.1 供试虫源
        1.2 棉铃虫幼虫饲料配方
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂
    2 实验方法
        2.1 棉铃虫不同UV-A处理
        2.2 dsRNA引物的设计
        2.3 dsRNA的体外合成
        2.4 dsRNA的注射
        2.5 棉铃虫总RNA的提取
        2.6 时空表达分析
        2.7 棉铃虫抗氧化酶活性的研究
        2.8 数据统计与分析
    3 结果与分析
        3.1 HaJNK在不同时长UV-A胁迫的表达
        3.2 沉默效率的检测
        3.3 UV-A胁迫对抗氧化酶活性的研究
    4 讨论
第四章 棉铃虫Hap38 MAPK基因的克隆及表达谱分析
    1 实验材料
        1.1 供试虫源
        1.2 供试样品
        1.3 棉铃虫幼虫饲料配方
        1.4 主要仪器
        1.5 主要试剂
        1.6 溶液配制和培养基
    2 实验方法
        2.1 棉铃虫总RNA的提取
        2.2 中间片段的克隆
        2.3 3'端和5'端序列获得
        2.4 克隆测序
        2.5 生物信息学分析
        2.6 时空表达分析
        2.7 数据统计与分析
    3 结果与分析
        3.1 棉铃虫总RNA的提取
        3.2 Hap38 MAPK基因的克隆和序列分析
        3.3 Hap38 MAPK同源性比对及系统发育分析
        3.4 Hap38 MAPK基因的表达模式分析
    4 讨论
第五章 棉铃虫Hap38 MAPK在响应UV-A胁迫机制中的作用研究
    1 实验材料
        1.1 供试虫源
        1.2 棉铃虫幼虫饲料配方
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂
    2 实验方法
        2.1 棉铃虫不同UV-A处理
        2.2 dsRNA引物的设计
        2.3 dsRNA的体外合成
        2.4 dsRNA的注射
        2.5 棉铃虫总RNA的提取
        2.6 时空表达分析
        2.7 棉铃虫抗氧化酶活性的研究
        2.8 数据统计与分析
    3 结果与分析
        3.1 Hap38 MAPK在不同时长UV-A胁迫的表达
        3.2 沉默效率的检测
        3.3 UV-A胁迫对抗氧化酶活性的研究
    4 讨论
第六章 总结与展望
    1 主要研究结果
        1.1 棉铃虫HaJNK基因的克隆及表达谱分析
        1.2 棉铃虫HaJNK在响应UV-A胁迫机制中的作用研究
        1.3 棉铃虫Hap38 MAPK基因的克隆及表达谱分析
        1.4 棉铃虫Hap38 MAPK在响应UV-A胁迫机制中的作用研究
    2 论文创新点
    3 论文不足及展望
致谢
参考文献
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]UV-B照射对烟蚜抗氧化系统的影响[J]. 刘小飞,孟建玉,张滢,张长禹.  环境昆虫学报. 2018(06)
[2]棉铃虫种群调查及测报技术[J]. 姜玉英,刘杰,曾娟,杨清坡,陆宴辉.  应用昆虫学报. 2018 (01)
[3]逆境胁迫对油菜谷胱甘肽还原酶基因表达及其酶活性的影响[J]. 张腾国,聂亭亭,孙万仓,史中飞,王娟.  应用生态学报. 2018(01)
[4]RNAi技术的最新研究进展[J]. 王伟伟,刘妮,陆沁,凌晓霏,陈航.  生物技术通报. 2017(11)
[5]不同波长诱虫灯对红树林主要害虫的诱集作用[J]. 王林聪,李志刚,李军,韩诗畴.  环境昆虫学报. 2016(05)
[6]紫外线胁迫对红色型豌豆蚜生物学特性的影响[J]. 袁伟宁,朱仰艳,孙小玲,杨巧燕,刘长仲.  植物保护. 2016(04)
[7]棉铃虫发育历期的地理变异[J]. 陈元生,涂小云.  环境昆虫学报. 2016(04)
[8]高温胁迫对扶桑绵粉蚧成虫过氧化物酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性的影响[J]. 袁盛勇,孔琼,吴晶莹,秦文旭,刘小红,陈振毅,马廷霞,尹久婷.  环境昆虫学报. 2016(04)
[9]NaCl胁迫对酸枣幼苗AsA-GSH循环的影响[J]. 吕新民,杨怡帆,鲁晓燕,靳娟,樊新民.  植物生理学报. 2016(05)
[10]UV-B与重金属Cd双重胁迫对麦长管蚜种群生长发育和繁殖的影响[J]. 王萍,杜一民,杨杰,车文艳,高欢欢,赵惠燕,胡祖庆,胡想顺.  昆虫学报. 2016(01)

博士论文
[1]UV胁迫下棉铃虫生殖补偿研究及Hsps基因的克隆与表达[D]. 张长禹.华中农业大学 2010

硕士论文
[1]冷胁迫条件下荒漠昆虫小胸鳖甲JNK信号转导通路相关基因的表达及功能研究[D]. 阮梦鸽.新疆大学 2016
[2]白鲢p38 MAPK,c-fos,c-jun基因克隆及其微囊藻毒素暴露后的表达分析[D]. 李园园.河南师范大学 2015
[3]α1，2-岩藻糖转移酶基因转导对人卵巢癌细胞RMG-I p38MAPK信号通路介导的凋亡的影响[D]. 丛建萍.中国医科大学 2010



本文编号：3197234