利用CRISPR/Cas9技术构建tnnt2a基因突变斑马鱼及表型分析

发布时间：2021-05-20 03:49

　　心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T,cTnT）作为心肌纤维细肌丝的结构蛋白,参与心脏兴奋收缩耦联过程。tnnt2a为斑马鱼cTnT基因的亚型。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了可稳定遗传tnnt2a缺失突变斑马鱼。对tnnt2a缺失突变体进行表型分析,结果显示tnnt2a+/-斑马鱼心脏无明显异常,而tnnt2a-/-斑马鱼心脏在胚胎发育早期具有显著的突变表型,表现为心脏无搏动、心房和心室增大、心包积液,并于受精后6⁷天死亡。运用real time RT-PCR检测tnnt2a、actc1a、tpm4a、myl7和vmhc基因在转录水平的表达情况,结果显示tnnt2a^-/^-（Δ2）斑马鱼tnnt2a基因在发育的各时间点表达水平均显著下降;而actc1a、tpm4a、myl7和vmhc基因在突变体胚胎发育早期表达增高,晚期则表达下降。进一步对心脏组织进行电镜观察和免疫荧光染色,结果显示tnnt2a^-/^-（Δ2）斑马鱼心脏无正常粗、细肌丝结构,同时F-... 

【文章来源】：生理学报. 2017,69(03)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物
    1.2 抗体及荧光染料
    1.3 靶位点选择和突变体鉴定引物设计
    1.4 获得F0突变嵌合体 (mosaic) 斑马鱼
    1.5 获得tnnt2a基因纯合突变 (tnnt2a-/-) 斑马鱼
    1.6 tnnt2a-/-斑马鱼表型分析及心率记录
    1.7 Real time RT-PCR检测基因表达情况
    1.8 tnnt2a-/-斑马鱼心脏细胞超微结构分析
    1.9 tnnt2a-/-斑马鱼免疫荧光染色
    1.1 0 数据处理和统计分析
2 结果
    2.1 F0突变嵌合体斑马鱼测序结果
    2.2 获得tnnt2a基因纯合突变斑马鱼
    2.3 tnnt2a基因突变斑马鱼表型分析和心率
    2.4 tnnt2a-/- (Δ2) 斑马鱼心肌肌节基因表达水平
    2.5 tnnt2a-/- (Δ2) 斑马鱼心脏组织电镜超微结构观察和免疫荧光染色
3 讨论



本文编号：3197030