水稻线粒体基因orf290的功能初步分析
发布时间：2021-06-07 05:12
本实验室前期,以HL-CMS不育系YTA为材料,克隆并鉴定了一个6.7 kb的HL-CMS相关线粒体序列HL-sp1,根据序列预测含2个orfs,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。本文以构建的转基因水稻超表达orf290对育性的影响,分析了水稻线粒体基因orf290的功能,主要结果如下:1.利用YTA为材料克隆得到目的基因orf290,以MH63基因组DNA为模板利用巢式PCR扩增得到线粒体信号肽Rf1b5’,利用植物双元表达载体pCAMBIA1305.1构建了含有线粒体信号肽（35S::Rf1b5’::orf290）和不含线粒体信号肽（35S::orf290）的超表达载体,以YTB为受体,通过农杆菌介导完成遗传转化,获得超表达转基因阳性植株。2.以YTA和YTB分别为阴性及阳性对照,对35S::Rf1b5’::orf290转基因植株花粉可育度和套袋结实率进行统计分析,结果表明除个别植株花粉可育度几乎为0外,所有其它转基因植株花粉可育度均在30%以下,套袋结实率在50%左右。实验证实线粒体基因orf290与水稻细胞质雄性不育相关。3.以水稻的单拷贝基因蔗糖磷酸合成酶基因...
【文章来源】：中南民族大学湖北省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pCAMBIA1305.1载体结构（引自Http://www.cambia.org）
方式检测 orf290 的表达量，每个样品设置 3 个重复果与分析线粒体基因 orf290 的克隆 gDNA 为模板，PCR 扩增线粒体基因 orf290 的全了 2 个带有不同酶切位点的质粒，分别为 pMD18-T90 BglⅡ，预期大小都为 873bp，图 2.1、2.2 的结果的阳性菌落送公司测序，并将测序正确的进行保菌
gDNA 为模板，PCR 扩增线粒体基因 orf290 的全了 2 个带有不同酶切位点的质粒，分别为 pMD18-T90 BglⅡ，预期大小都为 873bp，图 2.1、2.2 的结果的阳性菌落送公司测序，并将测序正确的进行保菌图 2.1 pMD18-T- orf290 NcoⅠ载体质粒 PCR 鉴定M：DL2000 ； 1-6：不同的单克隆e identification of recombinant plasmids pMD18-T-orf290NcoM: DL2000; 1-6: different clones
【参考文献】：
期刊论文
[1]高等植物线粒体基因组测序和序列分析[J]. 李双双,薛龙飞,苏爱国,雷彬彬,王玉美,华金平. 中国农业大学学报. 2011(02)
[2]植物细胞质雄性不育分子机理研究进展[J]. 凌杏元,周培疆,朱英国. 植物学通报. 2000(04)
本文编号：3215938
【文章来源】：中南民族大学湖北省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pCAMBIA1305.1载体结构（引自Http://www.cambia.org）
方式检测 orf290 的表达量，每个样品设置 3 个重复果与分析线粒体基因 orf290 的克隆 gDNA 为模板，PCR 扩增线粒体基因 orf290 的全了 2 个带有不同酶切位点的质粒，分别为 pMD18-T90 BglⅡ，预期大小都为 873bp，图 2.1、2.2 的结果的阳性菌落送公司测序，并将测序正确的进行保菌
gDNA 为模板，PCR 扩增线粒体基因 orf290 的全了 2 个带有不同酶切位点的质粒，分别为 pMD18-T90 BglⅡ，预期大小都为 873bp，图 2.1、2.2 的结果的阳性菌落送公司测序，并将测序正确的进行保菌图 2.1 pMD18-T- orf290 NcoⅠ载体质粒 PCR 鉴定M：DL2000 ； 1-6：不同的单克隆e identification of recombinant plasmids pMD18-T-orf290NcoM: DL2000; 1-6: different clones
【参考文献】：
期刊论文
[1]高等植物线粒体基因组测序和序列分析[J]. 李双双,薛龙飞,苏爱国,雷彬彬,王玉美,华金平. 中国农业大学学报. 2011(02)
[2]植物细胞质雄性不育分子机理研究进展[J]. 凌杏元,周培疆,朱英国. 植物学通报. 2000(04)
本文编号：3215938
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