泡状棘球蚴骨桥蛋白基因的克隆和生物信息学分析

发布时间：2021-06-07 09:01

　　目的泡状棘球蚴病是一种浸润性生长为主的人兽共患疾病,大多数原发于肝脏,有“虫癌”之称。目前对其迁徙和转移机制尚不明确。有研究发现骨桥蛋白（OPN）可以促进肿瘤干细胞迁徙和转移。通过对泡球蚴OPN基因进行克隆并对其生物信息学进行分析,为后续研究奠定基础。方法取感染多房棘球蚴的长爪沙鼠提取泡球蚴原头节,提取泡球蚴总RNA,逆转录成cDNA,从NCBI基因数据库中通过BLAST找到可能的OPN基因保守序列片段（EMmg-13d08.q1k）通过软件设计引物,PCR扩增目的基因测序与多房棘球蚴OPN基因同源性片段再次上传至NCBI进行比对,应用RACE方法进行3’-RACE PCR利用引物合成3’-RACE cDNA第一链,以3’-RACE cDNA为模板进行巢氏PCR反应,5’-RACE PCR合成5’-RACE cDNA第一链,得到5’-RACE cDNA纯化进行巢氏PCR反应。软件对泡球蚴OPN基因保守序列、3’-RACE测序序列、5’-RACE测序序列进行校正拼接得到泡球蚴OPN基因全长序列。推测OPN开放阅读框（ORF）所对应的氨基酸序列,进行蛋白质二级结构、三级结构预测及抗原位表位... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

多房棘球绦虫与寄主饲养细胞共培养的建立（SpiliotisM等，2009）

泡状棘球蚴骨桥蛋白基因的克隆和生物信息学分析6图1多房棘球绦虫与寄主饲养细胞共培养的建立（SpiliotisM等，2009）Fig1FlowchartsummarizingthesetupofE.multilocularismetacestodeco-cultureswithhostfeedercells(FromSpiliotisMet,al2009)b.制备无宿主细胞培养液，按照a步骤培养Hela细胞，一周后离心取上清液，每毫升上清液加入1μLβ-巯基乙醇、1μL浴铜灵二磺酸、1μLL-半胱氨酸和双抗。放置-80℃保存备用。培养3月后的小囊泡加入无宿主细胞培养液放入75cm2培养瓶，培养瓶中充进氮气，封口。放置37°Ｃ培养箱。每2-3天更换无宿主细胞培养液，连续培养3月，观察囊泡生长情况。流程图如图（2）。图2无宿主细胞的多房棘球绦虫培养体系的建立（SpiliotisM等，2009）Fig2FlowchartsummarizingsetupofE.multilocularismetacestodesinaxenic(host-cellfree)culture.(FromSpiliotisMet,al2009)

泡球蚴总RNA提取Fig.1TheelectrophoreticbandsoftotalRNAfromEchinococcusmultilocularis

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3216287