大豆GmAAP基因的克

发布时间：2021-06-07 09:56

　　氨基酸通透酶（AAP）在植物吸收和转运氨基酸的过程中发挥至关重要的作用。拟南芥AtAAP1是植物中发现的第一个氨基酸转运蛋白,在水稻、玉米、马铃薯、豌豆、蚕豆、菜豆等农作物中也有较多报道。目前,关于大豆GmAAP的研究却较为少见,AAP能提高豆科植物对外源氮的吸收与利用率,增加种子内贮藏蛋白含量,进而提升大豆品质。本研究从大豆中成功克隆出GmAAP基因,对其进行生物信息学分析和亚细胞定位,明确该基因行使功能的区域;同时分别在大豆和转基因拟南芥中对该基因的表达模式进行研究;通过20种编码氨基酸亲和试验,结合转GmAAP基因拟南芥种子中20种编码氨基酸含量的试验结果,明确GmAAP蛋白对氨基酸的吸收特性;通过单一氨基酸培养试验,测定转基因大豆发根GmAAP基因表达和氮代谢关键酶活性,旨在解析GmAAP基因与氮代谢的关系。试验结果可为GmAAP功能的研究奠定基础,同时也为大豆氮素的高效利用提供候选基因。主要结果如下:1.以大豆Williams 82为试验材料,通过RT-PCR同源克隆到GmAAP基因,其开放阅读框长度为1440 bp,编码479个氨基酸。生物信息学分析表明,GmAAP蛋白分子... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大豆叶片总RNA电泳结果

将亮带切胶回收后与 pCAMBIA3301-GFP 载体连接，连接产物转化大肠杆菌 DH挑取的单菌落扩繁，经菌液 PCR 验证得到的阳性克隆（图 2.3）测序后与 phytozo2.1 数据库中的 GmAAP 序列比对，结果表明成功克隆到长度为 1440 bp 的 GmAAP，并完成了表达载体 pCAMBIA3301-GFP-GmAAP 的构建。

将亮带切胶回收后与 pCAMBIA3301-GFP 载体连接，连接产物转化大肠杆菌 DH挑取的单菌落扩繁，经菌液 PCR 验证得到的阳性克隆（图 2.3）测序后与 phytozo2.1 数据库中的 GmAAP 序列比对，结果表明成功克隆到长度为 1440 bp 的 GmAAP，并完成了表达载体 pCAMBIA3301-GFP-GmAAP 的构建。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Overexpression of GmProT1 and GmProT2 increases tolerance to drought and salt stresses in transgenic Arabidopsis[J]. GUO Na,XUE Dong,ZHANG Wei,ZHAO Jin-ming,XUE Chen-chen,YAN Qiang,XUE Jin-yan,WANG Hai-tang,ZHANG Yu-mei,XING Han.  Journal of Integrative Agriculture. 2016(08)
[2]大豆氨基酸透性酶基因GmAAP2-like 1的克隆及功能初探[J]. 李美美,夏铜梅,王丹,梅圆圆,王宁宁.  植物生理学报. 2016(01)
[3]菲与NH4+-N和NO3--N共存对作物根系硝酸还原酶活性的影响[J]. 袁嘉韩,易修,顾锁娣,占新华,周立祥,徐仁扣.  南京农业大学学报. 2014(01)
[4]北方地区大豆根瘤菌的生物学特性[J]. 刘灵芝,陈玉玲,陈志刚,姜亮,吕晓锋.  土壤通报. 2007(01)
[5]高等植物中的谷氨酸脱氢酶及其生理作用[J]. 黄国存,田波.  植物学通报. 2001(04)



本文编号：3216366