甲状腺激素核受体基因突变(Thrαl E403X )导致小鼠甲状腺激素抵抗综合征的表型研究及其对小鼠大脑皮层发育影响的机

发布时间：2021-06-08 13:27

　　目的:甲状腺激素（Thyroid hormones,THs）在脑发育过程中发挥重要影响。其主要是通过与甲状腺激素核受体（Thyroid hormone receptors,THRs）结合,调控靶基因的转录,发挥其生物学功能。本研究根据首例报道的THRA基因突变患者的突变位点（THRA-E403X）,构建了Thrαl^E403x小鼠模型,对突变小鼠进行全身各系统表型分析,并重点探讨Thrαl^E403x突变对小鼠大脑皮层形态和功能影响的机制研究。方法:根据同源重组原理,利用同源DNA片段替换靶基因片段技术,对THRA基因第403位点的碱基进行定点改变（G-T）,进而改变对应的氨基酸序列（403E突变为403X）,制备出特异位点突变的Thrαl^E403x小鼠。实验小鼠周龄分别为出生后3周龄、6周龄、16周龄,分别相当于人类幼儿期、青春期、成年期。研究内容:（一）、小鼠全身表型分析:包括:1.对同窝的各组小鼠进行为期42周生长发育（体重、身长、尾长）监测;2.利用放射免疫测定方法检测小鼠甲状腺激素水平;3.利用Micro-CT检测... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

Thrα1E403X小鼠表型分析相关实验技术路线图

中国医科大学博士学位论文8123456789023456789图2.2本研究中小鼠足趾编号标记方法2.3实验方法2.3.1小鼠基因型鉴定方法（1）主要试剂配制1.配制小鼠鼠尾消化液（SSTE）：储备液：1.配2.5MNaCl储备液：7.305gNaCl+50mlddH2O2.配1MTris(PH=8.0)储备液：60.55gTris+40mlddH2O，定容至50ml，调溶液PH值为8.03.配10%SDS储备液：5gSDS+50mlddH2O4.配0.5MEDTA.2Na储备液：9.305gEDTA.2NA+40mlddH2O，定容至50ml，调溶液PH值为8.0工作液：将储备液稀释为工作液1.取100mM/NaCl：2ml2.取150mM/Tris：7.5ml3.取1%/SDS：5ml4.取100mM/EDTA.2Na:10ml5.取ddH2O：25.5ml6.总量50ml，即为SSTE工作液2.配制DNA凝胶电泳缓冲液（TBE缓冲液）

中国医科大学博士学位论文153结果3.1Thrα1E403X模型小鼠的建立运用同源重组原理，利用同源DNA片段替换靶基因片段技术，对THRA基因第9外显子第1207位碱基定点改变，由G变为T，引起对应第403位氨基酸由谷氨酸改变为终止密码子（403E突变为403X），制备出特异位点突变的Thra1E403X基因小鼠（如图3.1）。图3.1同源重组原理建立Thrα1E403X等位基因以及Thrα1E403X小鼠的建立注.图A．产生转基因小鼠的靶向载体的示意图，其中loxp在PGK/EM7-Neo的第8-9内含子和第9外显子上的Thra1E403(c1207G)突变为Thra1X403(c1207T)。随后使用cre转基因将neo盒取出。图B．利用DNA测序技术证实该突变。利用两种引物序列，获得450bp片段DNA：


本文编号：3218551