棉铃虫齿唇姬蜂生殖相关基因的初步研究
发布时间：2021-06-13 06:48
本文的研究对象为棉铃虫齿唇姬蜂Campoletis chlorideae Uchida,它是世界重大经济害虫棉铃虫Helicoverpa armigera（Hubner）的优势种寄生蜂。本课题组从田间采样发现了该蜂卵巢发育异常的现象,基于此,我们首先进行了转录组测序,筛选出卵黄原蛋白（Vitellogenin,Vg）及其受体（Vitellogenin receptor,VgR）2个生殖相关基因作为本研究的重点,研究其表达模式。并通过Bt（苏云金芽孢杆菌,Bacillus thuringiensis）Cry 1Ac毒蛋白处理,探明Cry 1Ac毒蛋白对该蜂生长发育及对Vg和VgR基因转录表达水平的影响。进一步,围绕雌蜂生殖异常,从解毒酶P450的2个基因进行了对比研究,希望通过昆虫的解毒机制来探明棉铃虫齿唇姬蜂卵巢发育异常的原因。取得以下结果。一、棉铃虫齿唇姬蜂卵黄原蛋白Vg基因表达模式卵黄原蛋白（Vitellogenin,Vg）是昆虫卵巢发育和卵子发生的关键蛋白。目前,有关寄生蜂卵黄原蛋白的研究明显不足,而有关幼虫内寄生蜂是否存在卵黄原蛋白尚无定论。首先,基于棉铃虫齿唇姬蜂雌蜂转录组数...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１?ＲＮＡ提取流程图??
整的??Ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ＿Ｎ?Ｓｕｐｐｅｒｆａｍｌｉｙ?ｄｏｍａｉｎ?（２２－７３９?ｂｐ），?—个?ＤＵＦ１９４３?结构域（７７１－１０４７ｂｐ）和??一个?ＶＷＤ?结构域（１４４６－１６２０ｂｐ）以及一个?Ｌｏｗ?ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ?ｒｅｇｉｏｎ?区域，如图?３－３?所示，??此外，还包含?４?个?Ｎ－ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ?ｓｉｔｅｓ?（ＮＸＳ／Ｔ）?ａｎｄ?５?个?Ｋ／ＲＸＸＲ?ｃｌｅａｖａｇｅ?ｓｉｔｅｓ。??嫵離彳＿丨＿＿丨丨丨丨一．?丨．丨晒－垂．??图３－３棉铃虫齿唇姬蜂Ｖｇ蛋白结构??Ｆｉｇ．?３－３．?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｄｏｍａｉｎ?ｏｆ?Ｖｇ?ｏｆ?Ｃａｍｐｏｌｅｔｉｓ?ｃｈｌｏｒｉｄｅａｅ??３．２．２．２棉铃虫齿唇姬蜂卵黄原蛋白基因及蛋白同源比对分析??对膜翅目２７种昆虫（Ｇｅｎｅ?Ｋ）如表３－２所示）的Ｖｇ蛋白进行了系统发育树分析，利用??ｍｅｇａＸ软件，建立ＮＪ树（Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值１０００），结果如图３－４所示。??＼?１?Ｓ＇??＼?Ｉ?ｆ?ｉ５??卜?—．?（?Ｊｊ?Ｍ?＇?ＢｉｍｐａＶＧ??／?ｆ?ｉ?１?＼?°??Ｉ?＼?９??ｄ??图３－４膜翅目２７种昆虫Ｖｇ蛋白系统进化树??Ｆｉｇ．?３－６?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?Ｖｇ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｏｆ?２７?Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ?ｓｐｅｃｉｅｓ??棉铃虫齿唇姬蜂与日本黑瘤姬蜂同属于同一支，这与他们同属姬蜂科匹配，同时，他们??与莖蜂科昆虫ｏｒ／ｓａｗｗｓ和ＣＶ／７／２Ｍ?亲缘关系最为接近，其次与小蜂总科昆虫??Ｃｅｒａｔｏｓｏｌｅｎ?ｓｏｌｍｓｉ?ｍａｒｃｈａｌｉ，?Ｎａｓｏｎｉａ?ｖｉｔｒｉｐ
３．２．２田间棉铃虫齿唇姬蜂卵巢异常雌蜂Ｋｇ基因的表达??棉铃虫齿唇姬蜂田间卵黄原蛋白卵巢异常与正常样本（均为７ｄ雌蜂样本）实时荧光定??量表达量如图３－６所示。转录组卵巢异常样本卵黄原蛋白的表达量有较高的水平，正常雌蜂??样本表达量较低，达到显著差异（ｐ＜０．０１）。??０．２?－Ｉ?＊＊??〇?０．０８?－??＾?０．０４?■?纖爾！??ｎｏｒｍａｌ?ａｂｎｏｒｍａｌ??Ｔｅｓｔ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ??图３－６田间正常雌蜂与卵巢异常雌蜂转录组样本巧表达量??田间正常雌蜂转录组样本：ｎｏｒｍａｌ；田间卵巢异常转录组样本：ａｂｎｏｒｍａｌ。数据显示为荧光定量表达量的平??均值示准差。＊＊表示表达量差异极显著（ｐ＜〇．〇ｌ）??Ｆｉｇ．?３－６?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?Ｖｇ?ｉｎ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ａｎｄ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｅｌｄ??Ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｅｌｄ：?ｎｏｒｍａｌ；?Ａｂｎｏｒｍａｌ?ｏｖａｒｉａｎ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅ?ｉｎ?ｆｉｅｌｄ：??ａｂｎｏｒｍａｌ．?Ｔｈｅ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｖａｌｕｅｓ?±ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｄｅｖｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．??Ｔｈｅ?＊＊＊＇?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｈｉｇｈｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖ
【参考文献】：
期刊论文
[1]5种生物杀虫剂对4种天敌昆虫的安全性评价[J]. 尹园园,吕兵,林清彩,陈浩,翟一凡,于毅,郑礼. 生物安全学报. 2018(02)
[2]棉铃虫齿唇姬蜂研究现状与展望[J]. 李星,杨赛赛,白素芬,李欣. 河南科学. 2017(06)
[3]昆虫卵子发生及其研究进展[J]. 彭晨星,吴松原,童晓玲,代方银. 蚕学通讯. 2017(02)
[4]昆虫卵黄原蛋白受体（VgRs）及其主要功能综述[J]. 王加伟,彭露,邹明民,杨一帆,汪蕾,尤民生. 环境昆虫学报. 2016(04)
[5]发育高温对烟粉虱寄生蜂雌蜂个体大小及抱卵量的影响[J]. 段敏,杨念婉,万方浩. 中国生物防治学报. 2016(01)
[6]蜜源食物对节肢动物天敌寿命、繁殖力和控害能力的影响[J]. 汪庚伟,田俊策,朱平阳,郑许松,徐红星,杨亚军,吕仲贤. 昆虫学报. 2014(08)
[7]我国生物源农药应用现状及对策探讨[J]. 李凡海,王桂清. 农业科技与装备. 2014(08)
[8]蜜蜂卵黄原蛋白的研究进展[J]. 张卫星,胥保华. 蜜蜂杂志. 2014(05)
[9]烟粉虱MEAM1隐种卵黄原蛋白受体基因cDNA的克隆、序列分析及在不同发育时期的表达[J]. 程璐,郭建洋,刘树生,叶恭银. 昆虫学报. 2013(06)
[10]棉铃虫齿唇姬蜂的人工繁育研究进展[J]. 刘素果,张继红,张寰,李瑄,王红托,苗麟,秦启联. 中国生物防治学报. 2012(01)
博士论文
[1]棉铃虫细胞色素P450CYP6B7基因过量表达及调控机制研究[D]. 徐莉.中国农业大学 2017
[2]Cry1Ac蛋白对腰带长体茧蜂的安全性评价及两者对亚洲玉米螟生理机制的研究[D]. 王增霞.中国农业大学 2016
[3]抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠蛋白质基因组学研究[D]. 朱勋.华中农业大学 2014
[4]转基因抗虫玉米次生代谢物质的变化及对亚洲玉米螟寄生性天敌腰带长体茧蜂的影响[D]. 白树雄.中国农业科学院 2011
[5]Bt杀虫蛋白和转基因抗虫棉花对棉铃虫及其天敌中红侧沟茧蜂的影响[D]. 刘小侠.中国农业大学 2005
硕士论文
[1]杀虫剂对烟蚜茧蜂的毒性及对其行为的影响[D]. 陈德锟.福建农林大学 2014
[2]Cry1Ab和Cry1Ac杀虫蛋白对粘虫及其寄生天敌的生态安全性评价[D]. 蒋善军.华中农业大学 2011
[3]转Bt基因抗虫玉米对天敌昆虫的影响[D]. 吴研.东北农业大学 2006
本文编号：3227221
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１?ＲＮＡ提取流程图??
整的??Ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ＿Ｎ?Ｓｕｐｐｅｒｆａｍｌｉｙ?ｄｏｍａｉｎ?（２２－７３９?ｂｐ），?—个?ＤＵＦ１９４３?结构域（７７１－１０４７ｂｐ）和??一个?ＶＷＤ?结构域（１４４６－１６２０ｂｐ）以及一个?Ｌｏｗ?ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ?ｒｅｇｉｏｎ?区域，如图?３－３?所示，??此外，还包含?４?个?Ｎ－ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ?ｓｉｔｅｓ?（ＮＸＳ／Ｔ）?ａｎｄ?５?个?Ｋ／ＲＸＸＲ?ｃｌｅａｖａｇｅ?ｓｉｔｅｓ。??嫵離彳＿丨＿＿丨丨丨丨一．?丨．丨晒－垂．??图３－３棉铃虫齿唇姬蜂Ｖｇ蛋白结构??Ｆｉｇ．?３－３．?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｄｏｍａｉｎ?ｏｆ?Ｖｇ?ｏｆ?Ｃａｍｐｏｌｅｔｉｓ?ｃｈｌｏｒｉｄｅａｅ??３．２．２．２棉铃虫齿唇姬蜂卵黄原蛋白基因及蛋白同源比对分析??对膜翅目２７种昆虫（Ｇｅｎｅ?Ｋ）如表３－２所示）的Ｖｇ蛋白进行了系统发育树分析，利用??ｍｅｇａＸ软件，建立ＮＪ树（Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值１０００），结果如图３－４所示。??＼?１?Ｓ＇??＼?Ｉ?ｆ?ｉ５??卜?—．?（?Ｊｊ?Ｍ?＇?ＢｉｍｐａＶＧ??／?ｆ?ｉ?１?＼?°??Ｉ?＼?９??ｄ??图３－４膜翅目２７种昆虫Ｖｇ蛋白系统进化树??Ｆｉｇ．?３－６?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?Ｖｇ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｏｆ?２７?Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ?ｓｐｅｃｉｅｓ??棉铃虫齿唇姬蜂与日本黑瘤姬蜂同属于同一支，这与他们同属姬蜂科匹配，同时，他们??与莖蜂科昆虫ｏｒ／ｓａｗｗｓ和ＣＶ／７／２Ｍ?亲缘关系最为接近，其次与小蜂总科昆虫??Ｃｅｒａｔｏｓｏｌｅｎ?ｓｏｌｍｓｉ?ｍａｒｃｈａｌｉ，?Ｎａｓｏｎｉａ?ｖｉｔｒｉｐ
３．２．２田间棉铃虫齿唇姬蜂卵巢异常雌蜂Ｋｇ基因的表达??棉铃虫齿唇姬蜂田间卵黄原蛋白卵巢异常与正常样本（均为７ｄ雌蜂样本）实时荧光定??量表达量如图３－６所示。转录组卵巢异常样本卵黄原蛋白的表达量有较高的水平，正常雌蜂??样本表达量较低，达到显著差异（ｐ＜０．０１）。??０．２?－Ｉ?＊＊??〇?０．０８?－??＾?０．０４?■?纖爾！??ｎｏｒｍａｌ?ａｂｎｏｒｍａｌ??Ｔｅｓｔ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ??图３－６田间正常雌蜂与卵巢异常雌蜂转录组样本巧表达量??田间正常雌蜂转录组样本：ｎｏｒｍａｌ；田间卵巢异常转录组样本：ａｂｎｏｒｍａｌ。数据显示为荧光定量表达量的平??均值示准差。＊＊表示表达量差异极显著（ｐ＜〇．〇ｌ）??Ｆｉｇ．?３－６?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?Ｖｇ?ｉｎ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ａｎｄ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｅｌｄ??Ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｉｅｌｄ：?ｎｏｒｍａｌ；?Ａｂｎｏｒｍａｌ?ｏｖａｒｉａｎ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓａｍｐｌｅ?ｉｎ?ｆｉｅｌｄ：??ａｂｎｏｒｍａｌ．?Ｔｈｅ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ｍｅａｎ?ｖａｌｕｅｓ?±ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｄｅｖｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．??Ｔｈｅ?＊＊＊＇?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｈｉｇｈｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖ
【参考文献】：
期刊论文
[1]5种生物杀虫剂对4种天敌昆虫的安全性评价[J]. 尹园园,吕兵,林清彩,陈浩,翟一凡,于毅,郑礼. 生物安全学报. 2018(02)
[2]棉铃虫齿唇姬蜂研究现状与展望[J]. 李星,杨赛赛,白素芬,李欣. 河南科学. 2017(06)
[3]昆虫卵子发生及其研究进展[J]. 彭晨星,吴松原,童晓玲,代方银. 蚕学通讯. 2017(02)
[4]昆虫卵黄原蛋白受体（VgRs）及其主要功能综述[J]. 王加伟,彭露,邹明民,杨一帆,汪蕾,尤民生. 环境昆虫学报. 2016(04)
[5]发育高温对烟粉虱寄生蜂雌蜂个体大小及抱卵量的影响[J]. 段敏,杨念婉,万方浩. 中国生物防治学报. 2016(01)
[6]蜜源食物对节肢动物天敌寿命、繁殖力和控害能力的影响[J]. 汪庚伟,田俊策,朱平阳,郑许松,徐红星,杨亚军,吕仲贤. 昆虫学报. 2014(08)
[7]我国生物源农药应用现状及对策探讨[J]. 李凡海,王桂清. 农业科技与装备. 2014(08)
[8]蜜蜂卵黄原蛋白的研究进展[J]. 张卫星,胥保华. 蜜蜂杂志. 2014(05)
[9]烟粉虱MEAM1隐种卵黄原蛋白受体基因cDNA的克隆、序列分析及在不同发育时期的表达[J]. 程璐,郭建洋,刘树生,叶恭银. 昆虫学报. 2013(06)
[10]棉铃虫齿唇姬蜂的人工繁育研究进展[J]. 刘素果,张继红,张寰,李瑄,王红托,苗麟,秦启联. 中国生物防治学报. 2012(01)
博士论文
[1]棉铃虫细胞色素P450CYP6B7基因过量表达及调控机制研究[D]. 徐莉.中国农业大学 2017
[2]Cry1Ac蛋白对腰带长体茧蜂的安全性评价及两者对亚洲玉米螟生理机制的研究[D]. 王增霞.中国农业大学 2016
[3]抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠蛋白质基因组学研究[D]. 朱勋.华中农业大学 2014
[4]转基因抗虫玉米次生代谢物质的变化及对亚洲玉米螟寄生性天敌腰带长体茧蜂的影响[D]. 白树雄.中国农业科学院 2011
[5]Bt杀虫蛋白和转基因抗虫棉花对棉铃虫及其天敌中红侧沟茧蜂的影响[D]. 刘小侠.中国农业大学 2005
硕士论文
[1]杀虫剂对烟蚜茧蜂的毒性及对其行为的影响[D]. 陈德锟.福建农林大学 2014
[2]Cry1Ab和Cry1Ac杀虫蛋白对粘虫及其寄生天敌的生态安全性评价[D]. 蒋善军.华中农业大学 2011
[3]转Bt基因抗虫玉米对天敌昆虫的影响[D]. 吴研.东北农业大学 2006
本文编号：3227221
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