WAC与sc35调控基因转录，R-loop及DNA损伤修复的研究

发布时间：2021-06-13 13:27

　　翻译后修饰指的是修饰基团添加到翻译后蛋白质的一个或者多个氨基酸残基上,可改变该蛋白的空间构象和生物学活性。翻译后修饰广泛参与调控细胞周期、增殖、凋亡、分化基因表达、信号传递等一系列生命活动,异常的翻译后修饰与疾病和肿瘤的发生密切相关。组蛋白泛素化是共价翻译后修饰之一,泛素化修饰过程通常由泛素激活酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3共同调节完成整个泛素级联反应。真核细胞中,染色质是由基因组DNA缠绕核小体构成的,核小体的核心部分是由组蛋白H2A,H2B,H3和H4各2个分子构成的蛋白8聚体。RNF20/RNF40二聚体（RING finger protein RNF20/RNF40 dimer）是催化人H2B组蛋白120位赖氨酸（lysine）单泛素化（H2Bub1）反应的E3泛素连接酶。H2Bub1介导基因转录调控,染色质重塑,并在DNA双链断裂损伤修复途径之一的同源重组修复（Homologous Recombination,HR）中发挥重要的作用。RNF20/RNF40二聚体的缺失会导致同源重组修复中修复因子不能募集到DNA损伤位点上,导致DNA双链断裂损伤的累积并影响基因组的稳定... 

【文章来源】：上海师范大学上海市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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RNF20/RNF40/WAC复合物在基因转录调控中的作用

R-loop的结构

第二章WAC与sc35有内源性的相互作用上海师范大学硕士学位论文10放入稀释好的二抗中，放在摇床上室温孵育1.5h，孵育结束后用1×TBST缓冲液洗膜3次，每次8-10min。6.曝光：将ECL发光底物A和B两种试剂等体积混合，取出完成抗体孵育的PVDF膜，放在保鲜膜上，正面朝上，将ECL混合液滴到PVDF膜上，放入化学发光成像仪中，调节适当的曝光时间，得到最优结果，最后对蛋白条带进行分析。2.4实验结果2.4.1WAC与sc35两种蛋白有相互作用图2-1WAC与sc35內源相互作用为了探究WAC与sc35两种蛋白的相互作用情况，我们进行了內源性Co-IP实验，裂解HCT116细胞获得全细胞提取物，加入ProteinAAgrose，WAC抗体或sc35抗体孵育过夜，通过ProteinAAgrose结合兔源抗体将目的蛋白沉淀下来，然后再进行Western-blot实验，用WAC,sc35以及β-actin抗体进行免疫印迹分析，来研究内源性的蛋白相互作用的情况。实验结果如图2-1所示，WAC抗体能将sc35蛋白沉淀下来，同时sc35抗体也能将WAC蛋白沉淀下来，而对作为照的IgG抗体则不能将sc35或WAC蛋白沉淀下来。β-actin抗体孵育组是本实验的对照组。这些结果表明两种蛋白质WAC与sc35有相互作用。2.5本章小结降解R-loop的方法有多种，可以防止由于R-loop的累积与转录复制碰撞形成的转录副产物威胁基因组的稳定性。sc35，RNF20/RNF40二聚体在维持基因组稳定性中都起到了重要的作用。与RNF20/RNF40复合物的功能一致，sc35的缺失也会导致R-loop的积累。WAC作为RNF20/RNF40二聚体的重要功能伙伴，与RNF20/RNF40二聚体形RNF20/RNF40/WAC复合物，共同发挥生物学功能。本章我们通过内源性的Co-IP实验证明WAC与sc35有相互作用，为接下来WAC与sc35是否在基因转录与DNA损伤修复中发挥作用的研究奠定了基矗


本文编号：3227606