大豆异黄酮对LRRK2 G2019S 和α-Syn A53T 双转基因PD动物模型的神经保护作用研究

发布时间：2021-06-15 01:08

　　帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种严重危害人类健康的神经退行性疾病。在我国,每年有近10万人被诊断为新发的PD患者。PD的病理特点包括神经元胞浆内出现特征性嗜酸包涵体——路易小体（Levy body）,以及基底神经节黑质纹状体环路障碍多巴胺（DA）能神经元变性缺失。临床表现分为运动症状（静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常等）和非运动症状（认知障碍、睡眠障碍、排泄障碍等等）。为了进一步了解PD的发病机制及潜在的治疗靶点,本实验模拟突变型LRRK2G2019S及α-synucleinA53T的双转基因PD果蝇和小鼠模型,筛选更好的模拟PD的双转基因动物模型。对已构建的PD果蝇模型以1 μM的大豆异黄酮（soy isoflavone）给予终生干预。1 8月龄的PD小鼠以30 mg/kg灌胃（i.g.）14天,结果显示,大豆异黄酮能够改善PD果蝇的寿命,对PD果蝇和小鼠的行为学都有所改变,并且在黑质和纹状体内提高了 TH、Nrf2、GCLC表达量,降低α-synuclein、p-LRRK2、p-JNK MAPK、p-p38 MAPK表达水平,对于多巴胺转运体... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．三种糢式果蝇的繁殖率以及生命周期的检测（ｍｅａｎ士ＳＦＭ：?ｎ＝８０?＊．?Ｐ?＜０．０５．??＊＊，Ｐ＜０．０丨＊＊＊，ＰＯ．ＯＯｌ）??３?Ｓｙｎ－Ａ５３Ｔ；；?ＬＲＫＫ２－ＧＳ２双转基因果蝇的运动能力??

第一部分?大豆异黄酮对Ｕ＜ＲＫ２？ｌｌｌ９ｓ和ｕ－ＳｙｎｗＴ双转基因｜＞Ｄ动物模型的神经保护机制研宄??一共九周的运动能力的检测过程中，三种模式果蝇的运动水平皆不如对照组，在??第三、四、五、六、七周较为明显（图３，?ａ）。统计结果显示，与对照组ＴＨ－ＧＡＬ４??相比，Ｓｙｎ－Ａ５３Ｔ：；ＬＲＲＫ２－ＧＳ２／ＴＨ、ＵＬＲＲＫ２－ＧＳ／ＴＨ两种果蝇在第五周时均有显??著性差异（图３，?ａ和ｂ）?（＊＊，?Ｐ＜０．０１）；第六周时，三种模式果蝇的运动能力均呈??下降趋势，且都具有显著性差异（图３，?ａ和ｂ）。在第七周时，除了对照组有果蝇能??爬过我们设置的行为学测试线，其他组的果蝇均不能在有限的时间内爬过我们的??测试线。实验结果表明，构建的双转基因果蝇Ｓｙｎ－Ａ５３Ｔ；；?ＬＲＲＫ２－ＧＳ２或者??ＬＲＲＫ２－ＧＳ２能很好的模拟帕金森氏病，为下一步研究做一个很好的基矗??ａ??—??????模式果蝇运动能力的比较??１２３４２６?７?８??—ＴＨ－Ｇｓｉ?――?ＳｒＡ５３Ｔ．．Ｔ＞ｒ＾?＊—？＊？?．．ＬＲＲＫ２Ｇ２Ｄ?ｉＳＳ＾Ｈ?－?ｉｙｎ＾３Ｔ／－－；；ＬＳＳＩ＜．２（Ｓ＞．／ｒＨ??ｂ－?Ｆｉｖｅｔｈ?ｗｅｅｋ?ｃ．?ｓｉｘｔｈ?ｗｅｅｋ??０．４－Ｉ?〇？＜？??＾?０．３－?爸?０?３．??ｉ。．１．?■?ｌｉｌｉ?干?ｆ。．１．?■??Ｊ＿?．?，?，?Ｊ＿?’?＿?Ｔ??＾?／?，／?＾??图３．三种模式果蝇运动能力的检测比较以及统计分析（ｍｅａｎ±ＳＥＭ；?ｎ＝８０??＊，Ｐ＜０．０１?）??４转基因小鼠的鉴定和筛选??４．１?ＰＣＲ检测鉴定ＬＲＲＫ２－Ｇ

大豆异黄酮对［及１＜１＜２｛＾｜？和《－８＞＋１１？「双转基因ＰＩ）动物模型的神经保护机制研究?第一部分??性条带，泳道０为阳性对照，Ｉ为阴性对照，以此判定具有阳性条带的为ＬＲＲＫ２－ＧＳ２??阳性杂合小鼠。??图４．?ＬＲＲＫ２－ＧＳ２阳性杂合小鼠鉴定??４．２?ＰＣＲ检测鉴定ＬＲＲＫ２－ＧＳ２转基因纯合小鼠??将Ｆ１代ＬＲＲＫ２－ＧＳ２阳性杂合小鼠相互杂交获得Ｆ２，?Ｆ２的基闪型可能为??ＬＲＲＫ２－ＧＳ２杂合、ＬＲＲＫ２－ＧＳ２杂合纯合或阴性三种，因此再将Ｆ２鉴定，鉴定后??Ｆ２代中的ＬＲＲＫ２－ＧＳ２阳性小鼠与阴性小鼠测交获得子代Ｆ３。鉴定结果如图５所??示，由于Ａ、Ｃ组小鼠后代均出现阴性结果，可判定为Ｆ２代中的ＬＲＲＫ２－ＧＳ２为??阳性杂合小鼠，而Ｂ组的小鼠均为阳性，ｎｊ判断４?Ｂ组对应的Ｆ２中的ＬＲＲＫ２－ＧＳ２??为ｍ性纯介小鼠，以此鉴别纯合子小鼠，繁育足够数量我们所需的小鼠。??＇?＾＾?，??图５．?ＬＲＲＫ２－ＧＳ２阳性纯合小鼠鉴定??４．３?ＰＣＲ检测鉴定ＬＲＲＫ２－ＧＳ２／ＳＹＮ－Ａ５３Ｔ双转基因小鼠??为丫获得双转袪因小鼠，将ＬＲＲＫ２－ＧＳ２杂合小鼠与Ａ５３Ｔ杂合小鼠进行杂交，??１７??

【参考文献】：
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本文编号：3230597