中华蜜蜂泛素结合酶基因AccUBE2N和AccUBE2G1的表达特性与功能分析
发布时间：2021-06-15 18:22
中华蜜蜂（Apis cerana cerana）是我国特有的优良蜜蜂品种,在促进经济发展和维持生态平衡方面发挥着重要作用。由于对外界刺激较为敏感,中华蜜蜂受环境胁迫影响较大,这制约了中华蜜蜂种群的生存与发展,研究中华蜜蜂的抗逆性能与防御机制对于中华蜜蜂种群的持续健康发展具有重要意义。泛素结合酶（Ubiquitin-conjugating enzyme E2,UBE2）在氧化应激响应、DNA损伤修复和调节免疫反应等多种细胞活动中具有重要功能。本研究以中华蜜蜂为实验材料,分离得到两个泛素结合酶基因,分别命名为AccUBE2N和AccUBE2G1,并对它们进行功能研究,从分子水平上阐述中华蜜蜂抗逆性能与泛素结合酶的联系,主要研究结果如下:（1）对AccUBE2N和AccUBE2G1进行序列分析,结果表明,AccUBE2N的开放阅读框的长度为456bp,编码由151个氨基酸残基组成的蛋白质,预测该蛋白的分子量为17.18kDa,预测等电点为5.72;AccUBE2G1的开放阅读框为507bp,编码由168个氨基酸残基组成的蛋白质,预测分子量为19.28kDa,等电点为4.99。（2）氨基酸序列...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泛素化示意图（Yeetal.,2009）
3.1 中华蜜蜂 AccUBE2N 基因的分离与生物信息学分析3.1.1 AccUBE2N 开放阅读框的分离与序列分析本实验根据 NCBI 数据库公布的中华蜜蜂 UBE2N 基因的核苷酸序列（GenBan注册号：NW_016018011.1），设计特异性引物 NF 和 NR（表 2-1），并以中华蜜蜂总RNA 的反转录产物 cDNA 为模板，扩增产物经 1%的 TAE 琼脂糖凝胶电泳检验证，将含有目的条带的凝胶回收，回收产物与连接载体 pEASY-T1 simple 进行连接 20min 后转化至大肠杆菌感受态细胞 DH5α 中。筛选出转化结果为阳性的菌液进行测序，使用DNAMAN 软件将测序结果与 NCBI 数据库的中华蜜蜂 UBE2N 基因序列进行比对，发现两序列一致，初步分离得到 AccUBE2N 基因的开放阅读框。序列特性分析表明，AccUBE2N 基因的开放阅读框为 456bp，编码由 151 个氨基酸组成的蛋白质，预测该蛋白的分子量为 17.18kDa，预测等电点为 5.72（图 3-1）。
山东农业大学专业学位硕士学位论文为了进一步了解中华蜜蜂 UBE2N 基因组的结构特性，本实验对中华蜜蜂 UBE2N基因结构组成进行了分析，并与意大利蜜蜂（Apis mellifera）、埃及伊蚊（Aedes aegypti）、家蝇（Musca domestica）和丽蝇蛹集金小蜂（Nasonia vitripennis）的 UBE2N 基因组结构组成进行了比较（图 3-2）。结果显示，AccUBE2N 基因的全长序列为 2579bp，由5'非翻译区（5' untranslated regions，5' UTR）、3'非翻译区（3' untranslated regions, 3'UTR）、2 个外显子和 2 个内含子组成（图 3-1A）。比较不同昆虫的基因结构，发现尽管基因序列的总长度具有较大差异，但都含有一个或两个外显子；不同昆虫外显子的总长度在进化过程中呈现保守性，但位置大不相同。综合考虑 UBE2N 基因全长以及结构组成的大小、位置，中华蜜蜂和意大利蜜蜂的 UBE2N 基因相结构似度更高。
【参考文献】：
期刊论文
[1]氢醌引起TK6细胞毒性的差异蛋白组学研究[J]. 沙焱,杨震宇,周伟,谢英. 中国职业医学. 2018(06)
[2]泛素结合酶E2 A在顺铂诱导的HeLa细胞应激反应中的作用[J]. 王玉强,李红娟,蒋天靓,曹亦菲,杨军. 癌变·畸变·突变. 2018(06)
[3]泛素-蛋白酶体途径与砷致氧化应激的研究进展[J]. 吕莹,胡勇. 医学理论与实践. 2018(02)
[4]中华蜜蜂酪胺受体基因克隆及表达分析[J]. 张丽珍,张永,胡景华,王子龙,曾志将. 遗传. 2018(02)
[5]中华蜜蜂遗传资源保护的方案与路径[J]. 王红芳,刘振国,王颖,胥保华. 中国蜂业. 2016(11)
[6]中华蜜蜂越冬管理现状与对策[J]. 王天波. 中国蜂业. 2016(02)
[7]氧化应激与DNA损伤[J]. 冉茂良,高环,尹杰,陈斌. 动物营养学报. 2013(10)
[8]中华蜜蜂在我国森林生态系统中的作用[J]. 杨冠煌. 中国蜂业. 2009(04)
[9]去泛素化酶的研究及其进展[J]. 王素霞,刘媛,吴慧娟,张志刚. 临床与实验病理学杂志. 2008(06)
[10]浅议“西蜂”压倒“中蜂”的危害性[J]. 李玉环. 农业科技与信息. 2008(12)
本文编号：3231547
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
泛素化示意图（Yeetal.,2009）
3.1 中华蜜蜂 AccUBE2N 基因的分离与生物信息学分析3.1.1 AccUBE2N 开放阅读框的分离与序列分析本实验根据 NCBI 数据库公布的中华蜜蜂 UBE2N 基因的核苷酸序列（GenBan注册号：NW_016018011.1），设计特异性引物 NF 和 NR（表 2-1），并以中华蜜蜂总RNA 的反转录产物 cDNA 为模板，扩增产物经 1%的 TAE 琼脂糖凝胶电泳检验证，将含有目的条带的凝胶回收，回收产物与连接载体 pEASY-T1 simple 进行连接 20min 后转化至大肠杆菌感受态细胞 DH5α 中。筛选出转化结果为阳性的菌液进行测序，使用DNAMAN 软件将测序结果与 NCBI 数据库的中华蜜蜂 UBE2N 基因序列进行比对，发现两序列一致，初步分离得到 AccUBE2N 基因的开放阅读框。序列特性分析表明，AccUBE2N 基因的开放阅读框为 456bp，编码由 151 个氨基酸组成的蛋白质，预测该蛋白的分子量为 17.18kDa，预测等电点为 5.72（图 3-1）。
山东农业大学专业学位硕士学位论文为了进一步了解中华蜜蜂 UBE2N 基因组的结构特性，本实验对中华蜜蜂 UBE2N基因结构组成进行了分析，并与意大利蜜蜂（Apis mellifera）、埃及伊蚊（Aedes aegypti）、家蝇（Musca domestica）和丽蝇蛹集金小蜂（Nasonia vitripennis）的 UBE2N 基因组结构组成进行了比较（图 3-2）。结果显示，AccUBE2N 基因的全长序列为 2579bp，由5'非翻译区（5' untranslated regions，5' UTR）、3'非翻译区（3' untranslated regions, 3'UTR）、2 个外显子和 2 个内含子组成（图 3-1A）。比较不同昆虫的基因结构，发现尽管基因序列的总长度具有较大差异，但都含有一个或两个外显子；不同昆虫外显子的总长度在进化过程中呈现保守性，但位置大不相同。综合考虑 UBE2N 基因全长以及结构组成的大小、位置，中华蜜蜂和意大利蜜蜂的 UBE2N 基因相结构似度更高。
【参考文献】：
期刊论文
[1]氢醌引起TK6细胞毒性的差异蛋白组学研究[J]. 沙焱,杨震宇,周伟,谢英. 中国职业医学. 2018(06)
[2]泛素结合酶E2 A在顺铂诱导的HeLa细胞应激反应中的作用[J]. 王玉强,李红娟,蒋天靓,曹亦菲,杨军. 癌变·畸变·突变. 2018(06)
[3]泛素-蛋白酶体途径与砷致氧化应激的研究进展[J]. 吕莹,胡勇. 医学理论与实践. 2018(02)
[4]中华蜜蜂酪胺受体基因克隆及表达分析[J]. 张丽珍,张永,胡景华,王子龙,曾志将. 遗传. 2018(02)
[5]中华蜜蜂遗传资源保护的方案与路径[J]. 王红芳,刘振国,王颖,胥保华. 中国蜂业. 2016(11)
[6]中华蜜蜂越冬管理现状与对策[J]. 王天波. 中国蜂业. 2016(02)
[7]氧化应激与DNA损伤[J]. 冉茂良,高环,尹杰,陈斌. 动物营养学报. 2013(10)
[8]中华蜜蜂在我国森林生态系统中的作用[J]. 杨冠煌. 中国蜂业. 2009(04)
[9]去泛素化酶的研究及其进展[J]. 王素霞,刘媛,吴慧娟,张志刚. 临床与实验病理学杂志. 2008(06)
[10]浅议“西蜂”压倒“中蜂”的危害性[J]. 李玉环. 农业科技与信息. 2008(12)
本文编号：3231547
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