CRISPR/Cas9技术对脊尾白虾蜕皮抑制激素基因的靶向敲除研究

发布时间：2021-06-16 19:29

　　甲壳动物的蜕皮与生长密切相关。已有的研究表明蜕皮抑制激素MIH在甲壳动物蜕皮过程中起着负调节作用。但是,由于甲壳动物功能基因研究平台的限制,迄今为止未见在活体内通过基因敲除的方法对甲壳动物MIH基因功能进行研究的报道。在前期研究中,本课题组成功实现了基于CRISPR/Cas9技术的脊尾白虾基因组编辑。本论文以脊尾白虾为研究对象,在其转录组数据基础上,成功获得了脊尾白虾MIH（Ec MIH）的全长序列,并对该基因表达特征进行了分析。在此基础上,通过共注射体外转录的Cas9 m RNA和g RNA的方法成功敲除了Ec MIH,获得幼体发育时间缩短的脊尾白虾个体,同时对其功能进行了初步研究。此外,本研究成功构建了Cas9核酸内切酶的分泌型表达载体p CT7-CHISP6H-Cas9,制备了Cas9重组蛋白,并在体外检测了其对脊尾白虾基因组编辑的可行性。主要结果归纳为以下两个方面:1.通过对脊尾白虾转录组数据分析和PCR验证确定了脊尾白虾Ec MIH的基因信息,获得了该基因的全长序列。Ec MIH的开放阅读框编码119个氨基酸,预测的分子量为13747.82 Da,等电点8.61,其基因由3个... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)山东省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

甲壳动物蜕皮调控机制(李旭光等，2014)

IH 调控甲壳动物蜕皮激素产生的信号通路(Chang and Myosed MIH signaling pathway regulating ecdysteroidogenesis iH 的研究主要集中在 MIH 多肽与基因结构、眼柄用机制以及 Y-器官对 MIH 应答等几个方面。由于限制，大多数关于 MIH 的研究主要还是维持在体H 的在体内的研究，对于更加深入的了解 MIH 的生9 简介是细菌和古细菌的 种天然免疫系统，通过特异性应序列进行切割，从而达到对自身的免疫(GasiunaRISPR 和 Cas 两部分结构（图 1.3）（图片引自 w

图 1.3 CRISPR/Cas 基因结构Figure 1.3 Structure diagram of CRISPR/Cas987 年，CRISPR 重复序列最早在大肠杆菌基因组中发现，该基因存在 5 段peat）并被不重复的间隔序列（spacer）隔开(Ishino et al. 1987)。而直到研菌体和质粒中的部分序列与 CRISPR 中重复序列之间的间隔序列相似in et al. 2005; Mojica et al. 2005; Pourcel et al. 2005)，对 CRISPR 的研究才出gou 等（2007）证实 CRISPR 中的间隔序列来自于病毒的基因组，噬菌体其基因组被细菌整合成 CRISPR 中的间隔序列，并且细菌对噬菌体的免疫序列的改变而改变(Barrangou et al. 2007)。而Cas蛋白则最早是被Jansen等ISPR 位点附近发现，同时研究人员还预测 Cas 蛋白具有 DNA 解旋酶和核但是具体功能还不确定(Jansen et al. 2002)。2005 年，Cas 蛋白的成员之为核酸内切酶，即为现在研究火热的 Cas9 蛋白(Haft et al. 2005)。2008 年， 蛋白之间的作用关系初次被 Brouns 等揭示，该研究表明 CRISPR 中的间

【参考文献】：
期刊论文
[1]甲壳动物蜕皮相关基因的研究进展[J]. 蒲红双,高祥刚,侯红漫,赫崇波,张振宇,史井运.  水产科学. 2015(06)
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硕士论文
[1]脊尾白虾繁殖生物学及人工苗种繁育技术的研究[D]. 栗治国.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2013



本文编号：3233652