细粒棘球绦虫囊化原头蚴AQP基因转录动态及异源表达实验研究

发布时间：2021-06-22 00:22

　　目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白（Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs）在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时期的转录表达。以细粒棘球蚴cDNA为模板,扩增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-1 6个基因编码区片段,同时,通过化学合成方法扩增另外6个EgAQPs（EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2）基因编码区片段,并在非洲爪蟾卵母细胞中检测这12个EgAQPs基因的透水功能,Western blot检测EgAQPs在卵母细胞膜上的表达。结果体外培养的原头蚴及感染小鼠的继发棘球蚴体积均随培养时间的延长而逐渐增大,棘球蚴囊内透明液体增多。RT-qPCR结果显示12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时间的转录表达水平均较低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母细胞的体积变化... 

【文章来源】：第三军医大学学报. 2020,42(21)北大核心CSCD

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【部分图文】：

体外培养0～180 d的囊化原头蚴光学显微镜观察 (×20)

图1 体外培养0～180 d的囊化原头蚴光学显微镜观察 (×20)2.3 RT-qPCR检测体内、体外培养不同时期囊化原头蚴EgAQPs基因转录表达水平

以ATP6和NDI作为内参基因,RT-qPCR检测小鼠体内培养不同时期(45 d至15个月)的继发棘球蚴AQPs基因相对转录表达水平(图3B)。EgAQP、EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-1和EgAQP9-2检测几乎无信号;EgAQP4-1、EgAQP4-2和EgAQP4-4基因虽然有相对转录表达值,但其值都太低,所有AQPs中最大相对转录表达值仅有0.065。2.4 棘球蚴12个EgAQPs及阳性对照RnAQP1基因扩增及重组质粒鉴定


本文编号：3241728