CTH基因遗传多态与心源性猝死风险的关联研究

发布时间：2021-06-23 06:45

　　目的:研究位于CTH（Cystathionine-gamma-lyase）基因3’非翻译区（3’untranslated region,3’UTR）内的四碱基插入/缺失（Ins/Del,Indel）多态位点（rs1 13044851）与中国汉族人群心源性猝死（Sudden cardiac death,SCD）风险的关联,并通过基因型-表型关联分析及生物信息学方法探究该多态在SCD发生发展中发挥的作用及其潜在分子机制。方法:（1）运用生物信息学工具筛选一批CTH基因3’UTR内的多态位点,并选取其中一个具有潜在功能的多态位点（rs1 13044851）作为候选遗传标记。使用病例-对照研究方法（112例SCD和417例正常对照）,采集血液样本,提取基因组DNA,进行PCR扩增,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对该候选多态位点进行基因分型,运用Logistic回归分析法对多态与SCD风险间的相关性进行分析;（2）使用免疫印迹法（Western blot,WB）检测不同基因型个体心肌组织中CTH蛋白的表达水平,并分析基因型与蛋白质表达量之间的关联;（3）使用Miranda软件预测可与CTH基因3 ’ U... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．?Ｃ７７／多态性位点（ｒｓ?１１３０４４８５１?＞等位基因测序图??Ｆｉｇ?２．?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＴＨ?（ｒｓｌ?１３０４４８５１）??

?１３０４４８５１多态位点插入型和缺失型等位基因的重组报告载体??ＰＧＬ３－ＣＴＨ－ＭＴ和ｐＧＬ３－ＣＴＨ－ＷＴ，并与ｐＲＬ－ＳＶ４０?（表达海肾荧光素酶）载体共??同转染２９３Ｔ细胞系，设立ｐＧＬ３－ＣＴＨ－ＷＴ／ＭＴ实验组和对照组，其中实验组加入??ｍｉＲ－ｌ３２４?ｍｉｍｉｃ，对照组力ｎ入ｍｉｍｉｃ?ｃｏｎｔｒｏｌ，培养２４ｈ后分另ｌｌ检测两种焚光素酶活??性，并计算比值。结果显示，与对照组相比，实验组的报告基因表达受到抑制，??且与ＷＴ实验组相比，ＭＴ实验组的抑制效果更加明显（图５）。该实验结果表明??ｒｓｌ?１３０４４８５１多态插入型序列可能通过与ｍｉＲ－１３２４结合，在转录后水平抑制ＣＴ／／??基因的表达；缺失型序列则下扰ｍｉＲ－１３２４与ｍＲＮＡ的结合，减弱了对Ｃ７７／基因??表达的抑制作用。??ＣＪ?ＭＴ＋ｍｉＲ－１３２４??＾?＾３?ＭＴ＋ｍｉｍｉｃ－ｃｏｎｔｒｏｌ??２．０－Ｉ?Ｓ?ＷＴ＋ｍｉＲ－１３２４??＾?ＷＭ?ＷＴ＋ｍｉｍｉｃ－ｃｏｎｔｒｏｌ?圓??图５？双荧光素酶报告基因系统检测０７／多态位点（ｒｓｌｌ３０４４８５１?）对基因转录活性的影响??Ｆｉｇ?５．?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＣＴＨ?（ｒｓｌ?１３０４４８５１）?ｏｎ?ｇｅｎｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ａｓ?ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ?ｂｙ??Ｄｕａｌ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ａｓｓａｙ?ｓｙｓｔｅｍ??注：＃表示Ｐ＜０．０５?（相较于ＷＴ实验组）；＊表示Ｐ＜０．０５，（相较于ＭＴ对照组）??２０??

【参考文献】：
期刊论文
[1]冠心病患者血浆中新型气体信号分子硫化氢的变化[J]. 江海龙,吴宏超,李志梁,耿彬,唐朝枢.  第一军医大学学报. 2005(08)



本文编号：3244455