基因工程法生产heparosan
发布时间：2021-06-25 15:47
肝素是一种抗凝药物,被广泛应用于医疗领域,但是目前市场上的肝素药物大多数都是由动物组织提取得到,有潜在的不安全因素和供应隐患。为了解决这一问题,非动物源肝素的制备成为现在的研究热点。而heparosan的多糖骨架和肝素类似,只是未将葡萄糖醛酸异构化为艾杜糖醛酸,也没有进行硫酸化修饰,可对其进行酶化学修饰制备肝素类药物。经过对heparosan合成路径的分析,本文选择谷氨酰胺含量丰富的食品级微生物谷氨酸棒状杆菌作为宿主,构建了产heparosan的重组菌株,为后续的肝素类药物的制备奠定了物质基础。本论文的主要研究结果如下:（1）通过将外源基因KfiA和KfiC导入到谷氨酸棒状杆菌中,构建了产heparosan的重组菌株AC,并且合成的heparosan是胞内产品,发酵36 h时胞内heparosan产量最高达331.2 mg/L。（2）以AC菌株为基础,通过过表达hasB和galU基因、外源添加KfiB和KfiD基因,构建了一株摇瓶产量1 g/L左右的重组菌株galU。还在BDH菌株的基础上,进行了糖酵解途径的弱化,最好的弱化菌株A3相比于BDH菌株产量提高了 17.53%。（3）确定了...
【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１肝素的五塘序列与抗凝血酶结合的示意图［３］??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]肝素类制品研究概述[J]. 赵梅,朱传利,文良柱,梅丽,卢敏,陈刚. 生物化工. 2018(06)
[2]途径优化强化枯草芽胞杆菌合成肝素前体[J]. 张琳培,王浩,周正雄,堵国成,陈坚,康振. 生物工程学报. 2017(06)
[3]高效测定发酵液中透明质酸含量的改良CTAB浊度法[J]. 文程,于慧敏,孙云鹏,王颖,沈忠耀. 中国生物工程杂志. 2010(02)
[4]肝素酶及其研究进展[J]. 孙永福,王凤山. 中国药学杂志. 2008(14)
[5]低分子肝素[J]. 林平,林英,王晓红. 临床军医杂志. 2006(05)
[6]浅谈肝素钠及其生产[J]. 周长江. 中小企业科技. 2001(04)
[7]肝素结构与功能的研究进展[J]. 高宁国,程秀兰,杨敬,张树政. 生物工程进展. 1999(05)
博士论文
[1]Heparosan的提取分离及其对肠道菌作用的研究[D]. 陈祥娥.山东大学 2012
[2]肝素提取纯化新工艺及降解后的生物活性研究[D]. 张丽萍.吉林大学 2010
硕士论文
[1]肝素酶Ⅰ、Ⅲ的表达和应用及E.coli K5 waaR基因的敲除[D]. 吕沈聪.浙江工业大学 2013
[2]肝素前体多糖的分离纯化研究[D]. 杨明康.浙江工业大学 2013
[3]K5多糖大肠杆菌发酵工艺优化及其K5裂解酶研究[D]. 高金卉.江南大学 2012
[4]E.coli K5高密度发酵生产heparosan及其分离纯化[D]. 黎鸿平.浙江工业大学 2012
[5]肝素精制及低分子量肝素的制备[D]. 张万忠.北京化工大学 2001
本文编号：3249482
【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１肝素的五塘序列与抗凝血酶结合的示意图［３］??
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?北京化工大学硕士学位论文???Ｖ——取心??—????Ｊ?ｏｃ＾ｊｍｈ＾?＜ＪＯＨ〇?＾??錢＾巴?二卜＇餐：多??＿＿一?．。Ｅ?＝?二访？??ｌ＾＾ＬｓＪ?ｓｒｓｒ１?＾?＾??图１－３超低分子肝素的酶化学法合成示意图［１９］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｏｆ?ｕｌｔｒａ－ｌｏｗ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｈｅｐａｒｉｎ??徐永梅等人在２０１２年又报道体外酶化学合成硫酸乙酰肝素的途径［２Ｇ］，如图图１－４??所示。大致的合成机制和上述超低分子肝素的合成类似，都是包括骨架合成和修饰两??个合成阶段。在欠片４和；的作用下将糖基供体上的糖基单元依次连接到二糖单??元上进行骨架的合成，然后在碱性条件下进行去乙酰化和Ｎ－硫酸化修饰，之后又进行??了异构化和〇－硫酸化修饰可最终制备硫酸乙酰肝素。??ｓｔａｒｔｎｏｄｗｃｃｈａｎｄｅ?＾?Ｊ?ＡＴ＾ｎｄｉｎａ?￥ｔｔ？?ｂ？ｃＷ？ｏ？?ＡＴ＾ｊ〇＜Ｓｎｇ?ｉ８＊?ｗｄ?ｌｉｒｆｃｗ?ｂＫｋｂｏｆｔ＊??ｆｌｓｐｅａｔ?ｈｗｏ?ｔｉｍｅｓ??ｌ?ｔＦＡ?ｊ?ｔＦＡ?Ｒ?１，?ａｔｏｔｍｅ?ｄ＊＿ｕ〇ｆ〇ｗ＊ｔｖＷｉｏｎ??Ｎ??Ｍ－ＴＦＡ?ｐ＾ｉａｄｅｃｆｔｓａｏｃｈｔｆｉｄｔ?（１＆ｍ？ｒ，?ｎ？２）?２?ｉｖ＾ｉｉｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａ＊?ＰＡＰＳ?？？ｉｉｆｏ?ｐ＊ｎｔ？ｄ？ａｉＳＫｄ？ｒｉｉ］？．?１?ｌ１Ｓｎ？ｒ?ｎ?＊２）??ｒ＾ｘｔａｔ?ｎ?ｅｍ?（ｎ?？?２．３，４，?？ｍｄ?Ｓ）?＾ＴＦ＊?Ｎｓｐ＆ｔｔｅｃａｓａｃｃｈａｒ
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝素类制品研究概述[J]. 赵梅,朱传利,文良柱,梅丽,卢敏,陈刚. 生物化工. 2018(06)
[2]途径优化强化枯草芽胞杆菌合成肝素前体[J]. 张琳培,王浩,周正雄,堵国成,陈坚,康振. 生物工程学报. 2017(06)
[3]高效测定发酵液中透明质酸含量的改良CTAB浊度法[J]. 文程,于慧敏,孙云鹏,王颖,沈忠耀. 中国生物工程杂志. 2010(02)
[4]肝素酶及其研究进展[J]. 孙永福,王凤山. 中国药学杂志. 2008(14)
[5]低分子肝素[J]. 林平,林英,王晓红. 临床军医杂志. 2006(05)
[6]浅谈肝素钠及其生产[J]. 周长江. 中小企业科技. 2001(04)
[7]肝素结构与功能的研究进展[J]. 高宁国,程秀兰,杨敬,张树政. 生物工程进展. 1999(05)
博士论文
[1]Heparosan的提取分离及其对肠道菌作用的研究[D]. 陈祥娥.山东大学 2012
[2]肝素提取纯化新工艺及降解后的生物活性研究[D]. 张丽萍.吉林大学 2010
硕士论文
[1]肝素酶Ⅰ、Ⅲ的表达和应用及E.coli K5 waaR基因的敲除[D]. 吕沈聪.浙江工业大学 2013
[2]肝素前体多糖的分离纯化研究[D]. 杨明康.浙江工业大学 2013
[3]K5多糖大肠杆菌发酵工艺优化及其K5裂解酶研究[D]. 高金卉.江南大学 2012
[4]E.coli K5高密度发酵生产heparosan及其分离纯化[D]. 黎鸿平.浙江工业大学 2012
[5]肝素精制及低分子量肝素的制备[D]. 张万忠.北京化工大学 2001
本文编号：3249482
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