矮牵牛TCP3和TCP4基因敲除对生长发育的影响
发布时间：2021-07-01 17:27
TCP基因家族是bHLH家族中特殊的一类转录因子。bHLH功能域由50-60个氨基酸组成,这些氨基酸分成明显的两部分:长度为10至15个氨基酸的碱性区和40个氨基酸左右的a-helix-100p-a-helix区（HLH区）。TCP家族被分为两个亚家族classI和classlI。根据TCP基因结构的不同差异,classlI又被细分成为ECE和CIN两支,其中CYCl类、CYC2类和CYC3类三个亚簇同属于ECE支。矮牵牛PhTCP3和PhTCP4属于CYC1类基因。在植物生长发育和形态发生作用的过程中,TCP基因家族主要参与花对称发育,调控植物结构,控制叶形态,衰老,参与胚胎发育,调节生理等方面。其中CYCl类基因的主要功能是主要调控植物的分枝。目前,对CYCl支的研究较多的是拟南芥的BRCl,它在MAX途径的下游参与调控腋芽的生长,参与生长素调控顶端优势以及调控分枝发育;在番茄中过量表达SIBRClb基因植株分枝明显减少,而基因沉默后表型观察分枝增多显著;在豌豆中PsBRCl基因的突变体分枝明显增加。本文通过对PhTCP3和PhTCP4基因的超表达以及敲除植株的表型（包括侧枝的分枝...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Ⅱ型CRISPR/Cas9系统作用示意图
微镜将观察细胞并选择清晰的视野进行拍照，同时添加标尺，为细胞的测量备。(3)叶片下表皮细胞大小的测量利用软件 Image J 测量细胞大小,选择边界清晰的细胞，勾出细胞大小的，用 ctrl+D 固定，Ctrl+M 测量，Alt+D 标号以防重复。3.3 结果与分析3.3.1pGMFTCP3 转基因植株的获得前期收获 pGMFTCP3 转基因植株的后代经鉴定实际上是 PhTCP3 SDRX 因的后代，所以要重新进行 pGMFTCP3 的转基因工作。3.3.1.1pGMFTCP3 农杆菌菌液检测用 513QF 作为上游引物和 504QR 作为下游引物对农杆菌进行 PCR 扩增， 1000bp 左右的片段（图 3-1 左），以及用 SOUPF 作为上游引物和 SOUPR 下游引物对农杆菌进行 PCR 扩增，得到 750bp 左右的片段（图 3-1 右）。
采用农杆菌介导的叶盘法将含有表达载体 pGMFTCP3 质粒的农杆牛 MD，具体步骤见 3.2.4，大约 15d 之后，未转入基因的叶片部位图 A），转入基因的部位分化出愈伤组织，将愈伤组织切下更换培养右便开始长芽（图 B），待芽长到 2～3 cm 时切下，更换至含有抗性基 MS6 中。将每个愈伤上生长的苗子编为 1 个遗传转化系。通过 B筛选，抗性植株能够正常生根，而非抗性植株则不生根（图 C）。上述实验因转化效率很低一共重复做了 4 次，在筛选分化培养 15 时期的愈伤组织，不定芽和抗性植株进行统计。pGMFTCP3 第一次共侵染了 101 块叶盘，得到了 5 块愈伤组织，3 块长出了不定芽，没植株，第二次转化矮牵牛共侵染了 105 块叶盘，得到了 8 块愈伤组织 不定芽，得到了 1 株抗性植株，第三次转化矮牵牛共侵染了 123 块叶 25 块愈伤组织，10 块长出了不定芽，得到 2 株抗性植株，第四次转侵染了 102 个块叶盘，得到了 7 块愈伤组织，3 块长出了不定芽，得性植株。四次一共侵染了 431 块叶盘，筛选得到 45 块抗性愈伤组织不定芽，最终筛选出 4 个抗性株系。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9基因组定向编辑技术的发展与在作物遗传育种中的应用[J]. 景润春,卢洪. 中国农业科学. 2016(07)
[2]CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展[J]. 郑小梅,张晓立,于建东,郑平,孙际宾. 生物技术进展. 2015(01)
[3]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展[J]. 刘志国. 畜牧兽医学报. 2014(10)
[4]一种新的由CRISPR/Cas系统介导的基因组靶向修饰技术[J]. 刘思也,夏海滨. 中国生物工程杂志. 2013(10)
[5]基因组编辑技术在植物中的研究进展与应用前景[J]. 谢科,饶力群,李红伟,安学丽,方才臣,万向元. 中国生物工程杂志. 2013(06)
[6]矮牵牛ECE支TCP基因的克隆及表达分析[J]. 邹世慧,王会平,余勇,马婧,郭余龙,李名扬. 园艺学报. 2013(02)
[7]Effect of Different Plant Growth Regulators on Callus Induction and in vitro Rapid Propagation of Wild Petunia Juss.[J]. Yan ZHAO*,Na XU,Zhongyou MA,Wei LIU School of Life Science,Anhui Science and Technology University,Fengyang 233100,China. Agricultural Science & Technology. 2012(05)
[8]乙二醇在非聚酯领域的应用[J]. 崔慧枝. 精细与专用化学品. 2009(Z1)
[9]被子植物花对称性的遗传控制[J]. 冯献忠,罗达. 植物生理与分子生物学学报. 2002(06)
硕士论文
[1]柑橘TCP家族生物信息学分析及CsTCP1转录因子参与果实成熟的功能验证[D]. 周延培.华中农业大学 2016
[2]矮牵牛PhTCP3、PhTCP4基因功能的初步研究[D]. 余勇.西南大学 2014
本文编号：3259561
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Ⅱ型CRISPR/Cas9系统作用示意图
微镜将观察细胞并选择清晰的视野进行拍照，同时添加标尺，为细胞的测量备。(3)叶片下表皮细胞大小的测量利用软件 Image J 测量细胞大小,选择边界清晰的细胞，勾出细胞大小的，用 ctrl+D 固定，Ctrl+M 测量，Alt+D 标号以防重复。3.3 结果与分析3.3.1pGMFTCP3 转基因植株的获得前期收获 pGMFTCP3 转基因植株的后代经鉴定实际上是 PhTCP3 SDRX 因的后代，所以要重新进行 pGMFTCP3 的转基因工作。3.3.1.1pGMFTCP3 农杆菌菌液检测用 513QF 作为上游引物和 504QR 作为下游引物对农杆菌进行 PCR 扩增， 1000bp 左右的片段（图 3-1 左），以及用 SOUPF 作为上游引物和 SOUPR 下游引物对农杆菌进行 PCR 扩增，得到 750bp 左右的片段（图 3-1 右）。
采用农杆菌介导的叶盘法将含有表达载体 pGMFTCP3 质粒的农杆牛 MD，具体步骤见 3.2.4，大约 15d 之后，未转入基因的叶片部位图 A），转入基因的部位分化出愈伤组织，将愈伤组织切下更换培养右便开始长芽（图 B），待芽长到 2～3 cm 时切下，更换至含有抗性基 MS6 中。将每个愈伤上生长的苗子编为 1 个遗传转化系。通过 B筛选，抗性植株能够正常生根，而非抗性植株则不生根（图 C）。上述实验因转化效率很低一共重复做了 4 次，在筛选分化培养 15 时期的愈伤组织，不定芽和抗性植株进行统计。pGMFTCP3 第一次共侵染了 101 块叶盘，得到了 5 块愈伤组织，3 块长出了不定芽，没植株，第二次转化矮牵牛共侵染了 105 块叶盘，得到了 8 块愈伤组织 不定芽，得到了 1 株抗性植株，第三次转化矮牵牛共侵染了 123 块叶 25 块愈伤组织，10 块长出了不定芽，得到 2 株抗性植株，第四次转侵染了 102 个块叶盘，得到了 7 块愈伤组织，3 块长出了不定芽，得性植株。四次一共侵染了 431 块叶盘，筛选得到 45 块抗性愈伤组织不定芽，最终筛选出 4 个抗性株系。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9基因组定向编辑技术的发展与在作物遗传育种中的应用[J]. 景润春,卢洪. 中国农业科学. 2016(07)
[2]CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展[J]. 郑小梅,张晓立,于建东,郑平,孙际宾. 生物技术进展. 2015(01)
[3]CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展[J]. 刘志国. 畜牧兽医学报. 2014(10)
[4]一种新的由CRISPR/Cas系统介导的基因组靶向修饰技术[J]. 刘思也,夏海滨. 中国生物工程杂志. 2013(10)
[5]基因组编辑技术在植物中的研究进展与应用前景[J]. 谢科,饶力群,李红伟,安学丽,方才臣,万向元. 中国生物工程杂志. 2013(06)
[6]矮牵牛ECE支TCP基因的克隆及表达分析[J]. 邹世慧,王会平,余勇,马婧,郭余龙,李名扬. 园艺学报. 2013(02)
[7]Effect of Different Plant Growth Regulators on Callus Induction and in vitro Rapid Propagation of Wild Petunia Juss.[J]. Yan ZHAO*,Na XU,Zhongyou MA,Wei LIU School of Life Science,Anhui Science and Technology University,Fengyang 233100,China. Agricultural Science & Technology. 2012(05)
[8]乙二醇在非聚酯领域的应用[J]. 崔慧枝. 精细与专用化学品. 2009(Z1)
[9]被子植物花对称性的遗传控制[J]. 冯献忠,罗达. 植物生理与分子生物学学报. 2002(06)
硕士论文
[1]柑橘TCP家族生物信息学分析及CsTCP1转录因子参与果实成熟的功能验证[D]. 周延培.华中农业大学 2016
[2]矮牵牛PhTCP3、PhTCP4基因功能的初步研究[D]. 余勇.西南大学 2014
本文编号：3259561
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3259561.html
最近更新
教材专著
