沙柳SpsFUCT基因的克
发布时间：2021-07-07 20:02
在植物中,核心岩藻糖基转移酶（FUCT全称为α-1,3-fucosyltransferase）通过N-糖基化修饰过程催化岩藻糖与N-聚糖相连,其产物核心岩藻糖继续发生糖基化修饰,参与植物激素调控、次生代谢、脱毒反应、信号转导等功能。FUCT是参与岩藻糖糖基化过程的重要酶,它通过影响岩藻糖糖基化修饰从而对植物的生长发育产生影响,涉及到分蘖角度变化及纤维素合成等方面。本研究以沙柳（Salix psammophila）为研究材料,根据红皮柳（Salix purpurea）岩藻糖基转移酶基因的CDS序列设计引物,通过PCR的方法,成功克隆了沙柳岩藻糖基转移酶基因的全长CDS序列,并命名为SpsFUCT。研究结果如下:1.同源克隆获得沙柳FUCT全长1569bp的CDS序列,编码522个氨基酸,分子量为58.74 KD,理论等电点为5.73。2.SpsFUCT蛋白质二级结构预测其为跨膜疏水性蛋白,含四个糖基化位点,不含信号肽。同源蛋白结构域、系统进化树结果表明,沙柳Sps FUCT与木本植物中的杞柳、毛果杨亲缘关系最近,蛋白结构域最相似;该蛋白属于Glyco-transf-10家族,具有GT10...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FUCT催化过程
图 2 沙柳 RNA 质量检测ity Inspection of Total RNA in Sa克隆成 cDNA，用在 5’U，得到目标基因条带（ 2000bp。对目标条带进合要求，经分子分光光体 PDONR222 进行 BP行 PCR 检测，结果（存在非特异性扩增，说
图 2 沙柳 RNA 质量检测Fig. 2 Quality Inspection of Total RNA in Salix psammophila3.1.2 沙柳 FUCT 基因 CDS 的克隆以 RNA 为模板，反转录合成 cDNA，用在 5’UTR 区和 3’UTR 区设计的引物对沙柳 cDNA 链进行 PCR 扩增，得到目标基因条带（图 3），图示扩增条带与目的基因目标条带大小一致，约为 2000bp。对目标条带进行切胶回收，结果如图 4 所示切胶回收产物目标条带大小符合要求，经分子分光光度计检测浓度及质量均符合实验要求。将目标基因与入门载体 PDONR222 进行 BP 反应，将产物用 DH5α 大肠杆菌进行转化，转化后对菌落进行 PCR 检测，结果（如图 5）表明有 15 个白色菌斑条带亮度和大小基本一致，不存在非特异性扩增，说明载体连接成功，待下一步测序。
【参考文献】：
期刊论文
[1]The mass-balance characteristics and sensitivities to climate variables of Laohugou Glacier No. 12, western Qilian Mountains, China[J]. JiZu Chen,ShiChang Kang,Xiang Qin,WenTao Du,WeiJun Sun,YuShuo Liu. Sciences in Cold and Arid Regions. 2017(06)
[2]LAZY1通过油菜素内酯途径调控水稻叶夹角的发育[J]. 张晓琼,王晓雯,田维江,张孝波,孙莹,李杨羊,谢佳,何光华,桑贤春. 作物学报. 2017(12)
[3]糖基转移酶超家族在肿瘤转移中的作用[J]. 陈茜茜,王立萍,余雯静,王涵玉,汪淑晶,张嘉宁. 生物化学与生物物理进展. 2017(10)
[4]版纳植物园揭示赤霉素和细胞分裂素相互作用促进小桐子分枝生长分子机理[J]. 郑庆伟. 农药市场信息. 2017(26)
[5]Unfolded protein response activation compensates endoplasmic reticulum-associated degradation deficiency in Arabidopsis[J]. Qingliang Li,Hai Wei,Lijing Liu,Xiaoyuan Yang,Xiansheng Zhang,Qi Xie. Journal of Integrative Plant Biology. 2017(07)
[6]北沙柳种质资源居群表型多样性[J]. 郝蕾,张国盛,穆喜云,韩胜利,王颖,宁瑞些,白玉荣,张磊. 西北植物学报. 2017(05)
[7]沙柳SpsLAZY1a和SpsLAZY1b基因克隆及生物信息学分析[J]. 张磊,叶志玮,赵晨曦,张国盛,杨海峰. 西北林学院学报. 2017(01)
[8]固沙先锋树种——沙柳[J]. 陈志强. 农民致富之友. 2016(18)
[9]辐射育种在林木育种中的作用及其发展[J]. 王岩冰. 现代园艺. 2016(12)
[10]沙柳（Salix psammophila）丛生枝生物量最优分配与异速生长[J]. 陈国鹏,赵文智,何世雄,付晓. 中国沙漠. 2016(02)
博士论文
[1]拟南芥和玉米糖基转移酶基因参与非生物胁迫耐性的功能研究[D]. 李攀.山东大学 2017
[2]沙柳丛生枝异速生长关系与数量动态研究[D]. 陈国鹏.甘肃农业大学 2016
[3]生长素及独脚金内酯介导H2O2调控番茄侧枝生长发育的机制研究[D]. 陈小娟.浙江大学 2015
[4]调控内源生长素和细胞分裂素水平实现棉花种子—纤维产量和品质的同步改良[D]. 赵娟.西南大学 2014
[5]弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达及N-糖基化位点突变对重组酶的影响[D]. 韩铭海.江南大学 2013
[6]草菇中性木聚糖酶和内切型纤维素酶酶学特性及分子解析[D]. 郑斐.南京林业大学 2013
[7]拟南芥生长素糖基转移酶基因UGT74D1的鉴定及功能研究[D]. 金尚卉.山东大学 2013
[8]拟南芥转录因子WRKY71对花和分枝发育的调控机制研究[D]. 于延冲.山东大学 2011
[9]拟南芥细胞分裂素N-糖基转移酶基因功能分析[D]. 王军.山东大学 2011
[10]细胞分裂素调节拟南芥花发育的研究[D]. 李兴国.山东农业大学 2008
硕士论文
[1]沙柳生物炭对铜污染改良作用研究[D]. 张静.内蒙古农业大学 2017
[2]沙柳SpsLAS基因克隆、组织特异性表达及表达载体构建[D]. 路东晔.内蒙古农业大学 2017
[3]不同平茬高度对沙柳生长状况的影响研究[D]. 马天琴.内蒙古农业大学 2017
[4]GDP-岩藻糖转运体生物学功能的基础研究[D]. 刘桐桐.大连医科大学 2017
[5]拟南芥pny突变体分析及沙柳PNY基因克隆与组织特异性表达分析[D]. 王文娟.内蒙古农业大学 2016
[6]沙柳TAC1基因克隆与生物信息学及组织表达特性分析[D]. 马月林.内蒙古农业大学 2016
[7]棉花岩藻糖基转移酶家族基因（FucT）的发掘和FucT4功能初步分析[D]. 冯玥.南京农业大学 2016
[8]沙柳组培快繁和再生体系建立的初步研究[D]. 敖敦.内蒙古农业大学 2015
[9]FUT1/FUT4表达下调对A431肿瘤细胞荷瘤小鼠的血管新生的抑制作用[D]. 闫杰.大连医科大学 2008
[10]鄂尔多斯沙柳生态产业发展与技术选择研究[D]. 邬向民.中国农业科学院 2007
本文编号：3270276
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FUCT催化过程
图 2 沙柳 RNA 质量检测ity Inspection of Total RNA in Sa克隆成 cDNA，用在 5’U，得到目标基因条带（ 2000bp。对目标条带进合要求，经分子分光光体 PDONR222 进行 BP行 PCR 检测，结果（存在非特异性扩增，说
图 2 沙柳 RNA 质量检测Fig. 2 Quality Inspection of Total RNA in Salix psammophila3.1.2 沙柳 FUCT 基因 CDS 的克隆以 RNA 为模板，反转录合成 cDNA，用在 5’UTR 区和 3’UTR 区设计的引物对沙柳 cDNA 链进行 PCR 扩增，得到目标基因条带（图 3），图示扩增条带与目的基因目标条带大小一致，约为 2000bp。对目标条带进行切胶回收，结果如图 4 所示切胶回收产物目标条带大小符合要求，经分子分光光度计检测浓度及质量均符合实验要求。将目标基因与入门载体 PDONR222 进行 BP 反应，将产物用 DH5α 大肠杆菌进行转化，转化后对菌落进行 PCR 检测，结果（如图 5）表明有 15 个白色菌斑条带亮度和大小基本一致，不存在非特异性扩增，说明载体连接成功，待下一步测序。
【参考文献】：
期刊论文
[1]The mass-balance characteristics and sensitivities to climate variables of Laohugou Glacier No. 12, western Qilian Mountains, China[J]. JiZu Chen,ShiChang Kang,Xiang Qin,WenTao Du,WeiJun Sun,YuShuo Liu. Sciences in Cold and Arid Regions. 2017(06)
[2]LAZY1通过油菜素内酯途径调控水稻叶夹角的发育[J]. 张晓琼,王晓雯,田维江,张孝波,孙莹,李杨羊,谢佳,何光华,桑贤春. 作物学报. 2017(12)
[3]糖基转移酶超家族在肿瘤转移中的作用[J]. 陈茜茜,王立萍,余雯静,王涵玉,汪淑晶,张嘉宁. 生物化学与生物物理进展. 2017(10)
[4]版纳植物园揭示赤霉素和细胞分裂素相互作用促进小桐子分枝生长分子机理[J]. 郑庆伟. 农药市场信息. 2017(26)
[5]Unfolded protein response activation compensates endoplasmic reticulum-associated degradation deficiency in Arabidopsis[J]. Qingliang Li,Hai Wei,Lijing Liu,Xiaoyuan Yang,Xiansheng Zhang,Qi Xie. Journal of Integrative Plant Biology. 2017(07)
[6]北沙柳种质资源居群表型多样性[J]. 郝蕾,张国盛,穆喜云,韩胜利,王颖,宁瑞些,白玉荣,张磊. 西北植物学报. 2017(05)
[7]沙柳SpsLAZY1a和SpsLAZY1b基因克隆及生物信息学分析[J]. 张磊,叶志玮,赵晨曦,张国盛,杨海峰. 西北林学院学报. 2017(01)
[8]固沙先锋树种——沙柳[J]. 陈志强. 农民致富之友. 2016(18)
[9]辐射育种在林木育种中的作用及其发展[J]. 王岩冰. 现代园艺. 2016(12)
[10]沙柳（Salix psammophila）丛生枝生物量最优分配与异速生长[J]. 陈国鹏,赵文智,何世雄,付晓. 中国沙漠. 2016(02)
博士论文
[1]拟南芥和玉米糖基转移酶基因参与非生物胁迫耐性的功能研究[D]. 李攀.山东大学 2017
[2]沙柳丛生枝异速生长关系与数量动态研究[D]. 陈国鹏.甘肃农业大学 2016
[3]生长素及独脚金内酯介导H2O2调控番茄侧枝生长发育的机制研究[D]. 陈小娟.浙江大学 2015
[4]调控内源生长素和细胞分裂素水平实现棉花种子—纤维产量和品质的同步改良[D]. 赵娟.西南大学 2014
[5]弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达及N-糖基化位点突变对重组酶的影响[D]. 韩铭海.江南大学 2013
[6]草菇中性木聚糖酶和内切型纤维素酶酶学特性及分子解析[D]. 郑斐.南京林业大学 2013
[7]拟南芥生长素糖基转移酶基因UGT74D1的鉴定及功能研究[D]. 金尚卉.山东大学 2013
[8]拟南芥转录因子WRKY71对花和分枝发育的调控机制研究[D]. 于延冲.山东大学 2011
[9]拟南芥细胞分裂素N-糖基转移酶基因功能分析[D]. 王军.山东大学 2011
[10]细胞分裂素调节拟南芥花发育的研究[D]. 李兴国.山东农业大学 2008
硕士论文
[1]沙柳生物炭对铜污染改良作用研究[D]. 张静.内蒙古农业大学 2017
[2]沙柳SpsLAS基因克隆、组织特异性表达及表达载体构建[D]. 路东晔.内蒙古农业大学 2017
[3]不同平茬高度对沙柳生长状况的影响研究[D]. 马天琴.内蒙古农业大学 2017
[4]GDP-岩藻糖转运体生物学功能的基础研究[D]. 刘桐桐.大连医科大学 2017
[5]拟南芥pny突变体分析及沙柳PNY基因克隆与组织特异性表达分析[D]. 王文娟.内蒙古农业大学 2016
[6]沙柳TAC1基因克隆与生物信息学及组织表达特性分析[D]. 马月林.内蒙古农业大学 2016
[7]棉花岩藻糖基转移酶家族基因（FucT）的发掘和FucT4功能初步分析[D]. 冯玥.南京农业大学 2016
[8]沙柳组培快繁和再生体系建立的初步研究[D]. 敖敦.内蒙古农业大学 2015
[9]FUT1/FUT4表达下调对A431肿瘤细胞荷瘤小鼠的血管新生的抑制作用[D]. 闫杰.大连医科大学 2008
[10]鄂尔多斯沙柳生态产业发展与技术选择研究[D]. 邬向民.中国农业科学院 2007
本文编号：3270276
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3270276.html
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