利用CRISPR/Cas9技术构建LDLR/ApoE双基因缺陷猪模型以及二十二碳六烯酸对神经胶质瘤转录组影响研究

发布时间：2021-07-13 03:23

　　研究背景:动脉粥样硬化主要是由血脂的不平衡引起的,特别是低密度脂蛋白代谢障碍。载脂蛋白E（ApoE）和低密度脂蛋白受体（LDLR）基因突变在动脉粥样硬化的发生发展过程中起着十分重要的作用。ApoE蛋白的功能缺陷会导致Ⅲ型高脂蛋白血症（HLPⅢ）。肝细胞表面的LDLR蛋白对于肝脏中胆固醇（LDL-C）的清除起着至关重要的作用,LDLR基因功能的缺失导致在血液循环中过度积累LDL-C,并引起家族性高胆固醇血症（FH）。在动脉粥样硬化的研究中,广泛使用的模式动物主要有大鼠、小鼠及仓鼠。然而,鼠的外形和新陈代谢与人类相差很大,且鼠不会自发发生动脉粥样硬化,且形成斑块后不会斑块破裂。与此同时,猪被广泛应用于生物医学和人类疾病研究,并且小型猪在冠状动脉解剖学、血流动力学、血脂蛋白表达谱等方面与人类有很高的相似性,能够模拟人类易损斑块形成和进展、自发性斑块破裂伴血栓形成,是构建动脉粥样硬化大动物模型的理想试验动物。目的:通过同时敲除巴马小型猪的ApoE、LDLR两个基因,使动物自发产生高脂血症,拟建立一种易损斑块形成发生率高、试验周期短、操作简便且稳定的动脉易损斑块动物模型。为研究动脉粥样硬化的发病... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CRISPR/Cas9打靶序列设计

南京医科用 BbsⅠ酶切 pX330，使质粒线性化（图 2A）。切胶330 质粒，与退火的 sgRNA 重新连接，送南京思普金6 引物测序，鉴定结果为 sgRNA 成功连接进入 pX33

重构Cas9打靶质粒测序结果A、B分别为LDLR的sgRNA1、sgRNA2与pX330连接后测序结果；C为ApoE的sgRNA与pX330连接后测序结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3281236