毛果杨BBE基因家族及部分基因的功能解析
发布时间：2021-07-13 18:34
小檗碱桥酶（berberine bridge enzyme,BBE）家族,是一类典型的黄素双共价氧化酶超家族（SCOPe d.58.32）的亚家族。我们的前期研究在发育木质部糖蛋白组学中识别出了多个杨树BBE基因,但其参与的生物学功能尚不清楚。我们识别出了毛果杨BBE家族所有成员,利用生物信息学手段分析了毛果杨BBE家族成员的信息,重点解析了PtBBE9a和PtBBE18a的表达特征,对其过表达功能进行了鉴定。本研究主要实验结果如下:识别出了 69个毛果杨BBE家族成员,对其进行分类,共分为A-F六类。大多数PtBBEs位于1号染色体和11号染色体上,显示毛果杨BBE家族扩张归功于染色体间的复制,染色体内复制以及基因串联复制。根据phytozome电子数据和运用RT-PCR手段,分析了毛果杨BBE基因家族的组织表达特征,PtBBE23a、PtBBE24a主要在木质部高丰度表达,PtBBE6b各个组织均有表达。筛选了一些可能参与茎发育和木质素生物合成相关的BBE成员,PtBBE9a基因在木质部高丰度表达,并随茎节数增加其表达量逐渐升高;PtBBE18a基因在木质部高丰度表达,其表达量也随...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２ＢＢＥ分子结构特征［１４］??－１４
?１绪论???Ａ?＿?一－?＾?Ｂ?Ｑ４２８一?Ｅ４ｉ！??而？＞?、嘗二??＾＾Ｙ１９３?＼??Ｃ?Ｅ４３Ｑ＞?＾一?Ｄ?Ｑ４３２?上一??Ｙ４７２?Ｎ４２８?Ｙ４７４??ｓ－ｒ－?－?Ｍ９＞??注：（Ａ）?Ｉ类活性位点：（Ｂ）?ＩＩ类活性位点；（Ｃ）?ＩＶ类活性位点；（Ｄ）?ＩＩＩ类活性位点。??图１－３ＢＢＥ活性位点及分类【９】??Ｆｉｇ．?１－３?Ａｃｔｉｖｅ?ｓｉｔｅ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢＢＥ－ｌｉｋｅ?ｅｎｚｙｍｅｓ［９］??１．３．３?ＦＡＤ辅因子与氧化还原反应??ＦＡＤ通过６－Ｓ－半胱氨酸，而－Ｎ卜组氨酸与蛋白质的双共价连接可能是ＢＢＥ－ＬＩＫＥ蛋??白质家族最显着的特性，这在任何其他黄素蛋白家族中都未报道过％但由于双共??价连接不是正确折叠的先决条件，所以在有些成员并中不存在双共价Ｍｍ。二价黄素??键能调节氧化还原电位，促进辅因子和底物结合，增加结构稳定性［１４，〃７８］。经典的ＢＢＥ??氧化酶通过还原的ＦＡＤ被分子氧快速再氧化，伴随着过氧化氢的形成和释放与??各种ＢＢＥ－ＬＩＫＥ成员接收的有机分子的性质和大小无关，相应底物的氧化会导致ＦＡＤ??辅因子的减少。为了再生辅因子以进行下一轮酶促转换，需要将其再氧化［７８，７９］。??特定的氧结合口袋被确定在底物结合区域相对的黄素辅因子一侧［Ｋ８Ｇ］。由于还原－??氧化过程的催化包括两个半反应，即还原和氧化，因此这对氧化还原反应是非常重要??的。在ＢＢＥ－ＬＩＫＥ酶的催化下，蛋白质底物和异咯嗪环的相互作用建立在ｒｅ侧的，因??此在氧化半反应的过程中激活氧的过程都被这些氨基酸编排。另一方面，■？＿侧异恶嗪环??上的氨基酸的参与底
?３结果与分析???进行半定量ＰＣＲ分析。与表达热图差异明显的基因采取了另外一至两对引物进行确??认。此外，由于有些序列相似性高，半定量引物无法将其区分，一些基因被作为一个??团队（ｔｅａｍ）?—起检测，图３－３?（ｂ）。凡８５幻６成熟的叶中高峰度表达。尸在??各个组织均有表达，在幼叶中表达量最高。办在各个组织均有少量表达。??Ｐ沒在成熟叶片，韧皮部及木质部均有表达，幼叶中几乎无表达。乃５５￡７如和??巧５５五你在木质部表达量高。在木质部特异表达。付在叶片中表达量??高，在木质部也少量表达。八５５￡／７６在幼叶中表达。和乃ＳＳ五％在老叶中表??达。乃５５五２如在各个组织中均有表达，幼叶中表达量略高。巧５５以２么??在初皮部少量表达。其余基因在这四个组织中表达量低。??（ｂ）幼叶老叶韧皮部木质部??Ｃ＾Ｅ９ＢＳ＾＾３；：＾ｃｔ／ｎ２?２７ｃ??ｆＪｔ．ＨＨｈ；１４ｄ?３５ｃ??一３．?０?０．?０?３．?０?服Ｍｈ?３０ｃ??＾?〇Ｑ?＞Ｈ?ＨＨ?（—；?ＨＨ?Ｉｓ?Ｐｔ．ＢＢｌ：２ｂ?３５ｃ??ｐｉ；?（３Ｌ，?Ｊ?Ｊ?Ｐｅ＾?Ｃ＾）?ＯＯ??，?ＰｔＢＢＥＪＳａ??Ｉ?■１?■■■■■■■■—??＿?．，?ｆｉｍｉｉｕ????ＬＢ９ＢＨＩ■■歷北％??ｐｔｍｓｃ??Ｌ?￥?Ｓ?—，祕?３５ｃ??ＲＢ６?ｒ？？５??匕１?７＾“?３５ｃ??Ｌ?；；￡？．?Ｔｖｍ?Ｉ??ｔｌｍｌＳ１?Ｔｅ，ｍ?３５ｃ??ＰｔＢＢＦ．ｌ＜ｋ??１：；＾＾，；?ＰｔｍＥ９ｈ?３５ｃ??Ｐｔ〇ａ￡２ｂ??ＳＩ?ｎＢＨＨＶ￣｜／ＨＷ６ｉ；?３１ｃ??ＰｔＨ＾ｉ?ＰｔＢＢＥ２３ａ
本文编号：3282585
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２ＢＢＥ分子结构特征［１４］??－１４
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